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文献和实验
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保存条件 :常温运输和保存
保质期 :两年
英文名 :miRNA Realtime qRT-PCR Kit
库存 :950
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
miRNA荧光定量检测试剂盒产品及特点:本试剂盒采用SYBRGreenI嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。本产品是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂。2×miRNAqPCRMix包含有TaqDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂等所有PCR所需要的成分。miRNAqPCRMix中所含的荧光染料SYBRGreenI可以与所有的双链DNA结合,使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的TaqDNApolymerase是经化学修饰的高效热启动酶,配合独特的缓冲体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。它具有下列特点:
1.简便、快捷完成miRNA的检测。
2.检测通量高,只需最少的RNA样本,即可同时进行多种目标miRNA的检测。
3.检测特异性好,独特的miRNA引物设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是Pre-miRNA的污染。
4.检测分辨率高:该系统能分辨单碱基差异的miRNA。
5.检测灵敏度高:可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA。
miRNA荧光定量检测试剂盒运输及保存:
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
自备试剂:样品、qPCR上游引物(Forwardprimer)等
miRNA荧光定量检测试剂盒使用方法
一、miRNAcDNA第一链合成
请参见miRNAcDNA第一链合成试剂盒产品使用手册。
miRNA荧光定量检测试剂盒二、miRNA荧光定量检测
1.室温融化2×miRNAqPCRMix和Reverseprimer(10μM)。
2.使用时请将2×miRNAqPCRMix上下颠倒轻轻均匀混合,避免起泡,并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀,其反应性能会有所下降。
3.按照下表组分配制荧光定量PCR反应体系:
4.建议反应程序设置如下:
miRNA荧光定量检测试剂盒注:本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10min条件下实现酶的活化。
注意事项
1.miRNA第一链cDNA的加入量不要超过RealtimePCR体积10%。
2.对于特殊的检测体系,高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增,根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(稀释10倍或者100倍)。
3.2×miRNAqPCRMix中含有SYBRGreenI和ROX染料,保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
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