产品详情
文献和实验
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保存条件 :常温运输和保存
保质期 :两年
英文名 :Instant HiFi PCR Kit
库存 :950
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
即用型长片段PCR试剂盒产品及特点本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液,含有除引物、模板以外的所有PCR试剂,包括PfuDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等,特别适合于高保真PCR反应。1.PfuDNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。
2.使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便,简化了PCR的准备工作。
3.PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少,有利于减少污染,降低实验误差。
4.本产品含电泳染料,PCR反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
5.由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验,得到的PCR产物可用于平末端克隆。
即用型长片段PCR试剂盒运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。
自备试剂:模板和引物。
即用型长片段PCR试剂盒使用方法
将本产品与用户自备的模板,引物混合液按下列推荐使用量(30uL反应体系)加入PCR管中即可进行PCR,反应结束后直接取5-15uL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30uL,各成分需要按比例增加或减少。
即用型长片段PCR试剂盒放入PCR仪中进行PCR。由于含有电泳示踪剂(注意:不是溴化乙锭等DNA染料),故PCR结束后可以取5-10uL直接上样电泳,红色染料电泳速度相当于50bpDNA片段。参考扩增条件:
即用型长片段PCR试剂盒注意:
1.本产品的PfuDNA聚合酶比TaqDNA聚合酶的延伸反应速率低,因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb需2分种。
2.Pfu酶3’-5’外切酶活性可降解引物,所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后,立即放入PCR仪中进行扩增,扩增完毕后立即进行电泳检测。
3.本产品扩增产物为平末端,不可以直接进行TA克隆,可以使用克必隆B载体(CAT#:51104)进行克隆。如需要进行TA克隆,建议对PCR产物纯化后,用加A试剂盒(CAT#:60105)加A后再进行TA克隆。
4.由于Pfu无5’到3’外切酶的活性,所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。
即用型长片段PCR试剂盒疑难解答
Q:为何PfuDNAPolymerase扩增效率不如TaqDNAPolymerase?
A:一是由于PfuDNAPolymerase具有3’-5’的外切活性,所以在合成过程中,该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对,影响了合成效率;二是它能通过3’-5’的外切活性使引物部分降解,降低引物结合模板的能力,进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
即用型长片段PCR试剂盒Q:使用本产品时还有哪些注意事项?
A:1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR长和高(考虑到被PfuDNAPolymerase的3’-5’的外切活性降解的因素);2.最好在反应前加PfuDNAPolymerase。
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上海烜雅生物科技有限公司
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