核酸电泳套装价格_品牌:xuanya-丁香通官网

保存条件：常温运输和保存

保质期：两年

英文名：One-Stop RNA Electrophoresis Pack

库存：870

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

核酸电泳套装产品及特点：
本产品是包括琼脂糖、去离子甲醛、RNA上样液、电泳液等在内的RNA电泳套装，专门用于RNA电泳分析。可以进行至少10次mini变性胶电泳。
1.即开即用，用户不需要自己进行RNase灭活、高压灭菌、pH调节等操作。
2.与Northern杂交等后续反应兼容

核酸电泳套装运输及保存：
常温运输和保存，但RNAon长期需要-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：EB(10mg/mL)、DEPC水。

核酸电泳套装使用方法
注意：所有器皿（三角瓶，电泳槽，枪头等）均需去除RNase。强烈推荐使用本公司的超强无毒的固相RNase清除剂。
一、配制琼脂糖甲醛变性胶（1.2%,100mL）
1.在三角瓶中加入下列成份:
琼脂糖 1.2-1.5g
无菌水 87mL
2.将琼脂糖加热融化后，加入10mL10×RNArun（注意：10×RNArun即10×MOPS电泳缓冲液，瓶子一旦打开，就很容易产生污染细菌，细菌大量繁殖后会释放大量RNase，所以剩下的10×RNArun最好-20℃放置）。
3.待胶冷却至60°C左右，再加下列成份:
甲醛 3.0mL
自备EB(10mg/mL) 2-4mL
注意：由于本试剂盒提供的RNAon中含EB，所以也可以不加EB，但效果较差。如果使用自备的其他染料，如SYBRGreenI，则不能同时使用其他染料，包括含EB的RNAon，用户需要另购不含EB的RNAon）。
4.混匀后倒胶,凝固半小时后即可以使用。

核酸电泳套装二、配制电泳液
5.将RNArun用超纯水稀释十倍后即成电泳液，所需要的体积根据使用的电泳槽决定。

核酸电泳套装三、变性RNA样品
6.在一干净的离心管中将5-10uLRNA和15uLRNAon混合，85℃保温10分钟后冰浴5-10分钟，直接上样。
注意：每一泳道至多可分析30mgRNA，通常用10-20mg总RNA进行Northern杂交，可以检测高丰度mRNA（占mRNA总量的0.1%以上）；如待测RNA含量极微，每个泳道需加0.5-3.0mgpoly(A)+RNA。

核酸电泳套装四、电泳
7.电泳时，将凝胶预电泳5min（电压为5V/cm）。随后加样品和分子量对照(如果有的话)，以3-4V/cm的电压电泳，直至染料迁移至胶下游的3/4处。
8.电泳结束后，在300nm紫外灯下拍照。

核酸电泳套装五、后续处理9.按标准方法进行Northern杂交等后续处理。

核酸电泳套装疑难解答
Q：RNA电泳为何最好使用RNARUN，不要使用DNA电泳液TAE或TBE？
A：一是因为RNARUN经过去RNase处理，而一般实验室使用的TAE或TBE都没有经过去RNase处理，故极有可能含RNase，使样品RNA降解。即使要灭活TAE或TBE中的RNase也十分麻烦，因为DEPC不能处理含Tirs的缓冲液；二是TEB含有，是研究多羟基醇和糖的经典试剂，它能与RNA中含多羟基的核糖反应生成糖络合物，故电泳时RNA带型十分弥散。在一定浓度范围内，RNA分子间还能通过形成分子间复合物，出现电泳时各种RNA以一条带的形式出现的现象。所以RNA电泳时要避免使用含的缓冲液。使用TAE效果虽然比TBE稍好，但文献报道（BioTechniques2000,28:414-415），它不能分离某些大小不同的RNA分子。

核酸电泳套装Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，xuanya初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过络合（如果使用TBE作电泳液的话）形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用xuanya优化的上样/变性/染色三用溶液RNAON可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的能与RNA的多羟基形成复合物，RNA很难形成锐利的条带。

核酸电泳套装Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNAErasol或RNase-freeDNase，由于RNase-freeDNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。

核酸电泳套装Q：为何我的植物RNA样品有4-5条带？
A：部分植物组织有叶绿体等质体，而叶绿体有核糖体，所以也有其rRNA。叶绿体的rRNA跟细胞浆里面核糖体的rRNA大小不同，所以一般会多出两条带（共4条rRNA条带）。小的tRNA和5SrRNA有时可见，有时不可见，取决于回收效率。

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