产品详情
文献和实验
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保存条件 :常温运输和保存
保质期 :两年
英文名 :Column Viral DNAOUT
库存 :860
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
柱式病毒DNAout产品及特点:本产品是在xuanya一管式病毒DNAOUT的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品及拭子(咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等)中提取微量病毒DNA的产品,它具有下列特点:
1.操作简单,整个过程只需要20分钟左右,不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2.灵敏度高,通过PCR检测到的最终灵敏度可以达到30-50拷贝/mL。
3.安全无毒,不需要使用和氯仿等有机溶液。
4.如果加上病毒离心富集步骤,最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
5.与PCR和荧光PCR兼容。
6.价廉物美,性价比远高于国外同类产品。
7.适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
柱式病毒DNAout运输及保存:
常温运输及保存,DNA病毒裂解液长期(1月以上)放置时需要放4℃,有效期一年。
自备试剂:无,但需要自备RNase-free的1.5mL离心管(耗材)。
柱式病毒DNAout使用方法
1.对于液体病毒样品:在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL液体病毒样品。如果病毒需要富集,可以将1.5mL液体在4℃24,000g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL后剩下的0.2mL用于第2步处理。对于拭子样品:将一个拭子放入离心管中,加入1mL自备的生理盐水,振荡器上充分振荡半分钟,然后转移0.2mL到1.5mL塑料离心管中,用于第2步处理。
2.加入0.6mLDNA病毒裂解液到第一步得到的0.2mL样品中,振荡30秒混匀后室温放置10分钟。
柱式病毒DNAout注意:DNA病毒裂解液在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3.短暂离心后将500uL溶液转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟。
4.12,000rpm室温离心1分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
5.将剩余溶液短暂离心后全部转移到步骤3的离心吸附柱中,室温放置2分钟。
6.12,000rpm室温离心1分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
7.加入0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000rmp室温离心1分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
8.12,000rpm室温离心1分钟(干甩),弃含穿透液的离心管。
9.将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free的1.5mL离心管中,在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100uLDNA洗脱液3.0,然后室温放置2分钟。
10.12,000rpm室温离心1分钟,离心管中的溶液即为病毒DNA溶液。
11.DNA样品可以直接用于PCR,也可放-20℃长期保存。
柱式病毒DNAout疑难解答
Q:提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子,每种RNA有很多拷贝),同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一),样品中病毒数往往又不是很多,使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少,所以操作中十分容易丢失。另外,由于得到的核酸绝对量很少,不能使用电泳和测OD检测,只能通过PCR或RT-PCR检测,而PCR或RT-PCR的条件又需要优化,所以要确定提取是否成功十分不容易。
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