λ噬菌体DNAout价格_品牌:xuanya-丁香通官网

保存条件：常温运输和保存

保质期：两年

英文名：One-Tube Viral DNAout

库存：860

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

λ噬菌体DNAout产品及特点：
本产品是专门用于从血清(血浆)等液体样品中提取病毒(如HBV)DNA的产品，其原理是异硫酸胍/LiCl溶液即能裂解病毒，又能沉淀DNA。本产品灵敏度高，稳定性好，使用简单快捷，尤其适合于整合到临床PCR检测试剂盒中。
1.回收率高，可以达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2.灵敏度高，通过PCR检测到的最终灵敏度可以达到30-50拷贝/mL。
3.一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
4.安全无毒，不需要使用和氯仿等有机溶液。
5.处理量大，如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
6.与PCR和荧光PCR兼容。
7.本产品只能用于科研，不能用于临床。

λ噬菌体DNAout运输及保存：
常温运输及保存，有效期一年。
自备试剂：IPA，70%乙醇

λ噬菌体DNAout使用方法
1.在1.5mL螺旋盖塑料离心管(不要使用压盖式塑料离心管)中加入0.2mL液体样品（血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等）。
1.1、如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品，则将拭子放入0.2mL自备生理盐水中挤压出液体，然后取0.2mL进行DNA提取。
1.2、如果是粪便等半固定样品，则取约0.3mL的样品，加入0,3自备生理盐水，震荡重悬，离心取0.2mL上清进行DNA提取。
1.3、如果血液，细胞培养液等含细胞的液体，可以离心用上清，也可以直接取用，但后者提取的DNA中有细胞的基因组DNA。
1.4、如果样品是实体组织或培养细胞，则需要在自备生理盐水中匀浆后离心，用0.2mL上清液（含病毒）进行DNA提取，但此种情况下最后得到的DNA不可避免的会含有基因组DNA。
1.5、如果液体样品中的病毒需要富集，可以使用1.5mL上述方法得到的液体在4℃24,000g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL、用剩下的0.2mL继续操作。
2.在0.2mL样品中加入0.6mLDNA病毒裂解液，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。
3.振荡30秒混匀后加入0.7mL自备的，振荡30秒混匀后，15,000g室温离心15分钟。
4.移弃上清，注意不要触及管底的DNA沉淀，加入1.0mL70%乙醇，振荡数秒后15,000g室温离心5分钟。
5.移弃上清，注意不要触及管底的DNA沉淀。再短暂离心数秒,移弃残留液体（残留的乙醇会影响后续反应）。如果此时离心面的管壁上有可见的膜状沉淀，属于正常现象（常见于血清血浆样品）。加入20uL核酸样品稀释液，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀，使其溶解。溶解液混浊或有少量不溶物是正常现象。不要离心只取上清使用，因为不溶沉淀物中含有DNA，必须取混合液使用（哪怕很浑浊）。
6.样品可以直接取适量用于PCR，也可保存于-20℃长期保存。

λ噬菌体DNAout疑难解答
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子，每种RNA有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸绝对量很少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而PCR或RT-PCR的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。

λ噬菌体DNAoutQ：一管式方法提取的DNA的纯度能够达到临床PCR实验的要求吗?
A：完全可以。Roche的许多临床用PCR诊断试剂就是使用类似的一管式方法。

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