一步法质粒DNA提取（独家）价格_品牌:xuanya-丁香通官网

保存条件：常温运输和保存

保质期：两年

英文名：One-Step Plasmid DNAOUT

库存：860

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

一步法质粒DNA提取（独家）产品及特点：
基于碱变性原理的质粒小量制备(Miniprep)是分子克隆研究中最常用的方法之一，其操作包括三种溶液处理，一般需要30分钟左右的时间才能得到可以上柱的质粒DNA初提液。本产品采用xuanya自主开发的一步式细菌裂解技术，只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA，比碱变性法快捷约20分钟。本产品的主要特点是:
1.一步式，提取一个样品只需5分钟左右，比传统的碱变性方法快捷。
2.适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝质粒的提取。适用于各种E.coli宿主菌。
3.质粒DNA产量跟经典碱变性法相当，一般1-5mL可以得到3-15ug（对低拷贝质粒）和5-35ug（对高拷贝质粒）。
4.所得质粒DNA呈超螺旋结构的比例比碱变性法更高。
5.基因组DNA污染少。但由于操作太快，溶液中的RNase来不及降解RNA，一般会有少量RNA污染，但不影响后续实验。
6.可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等后续实验。

一步法质粒DNA提取（独家）运输及保存：
常温运输及保存，溶液A长期保存需要放4℃，有效期一年。
自备试剂：无

一步法质粒DNA提取（独家）使用方法
1、用塑料离心管收集0.5-5mL过夜培养的饱和新鲜菌液，室温14000g离心半分钟，弃上清（培养基）。也可以使用-20℃冻存的细菌沉淀和4℃放置过夜的饱和细菌培养液，但质粒回收效率稍低。如果是中拷贝和高拷贝质粒，使用1.5mL菌液即可，如果是低拷贝质粒，最好使用3-5mL菌液。常见质粒拷贝数请参考附表。
2、在细菌沉淀中加入700uL溶液A，充分吹打或涡旋振荡半分钟。
3、将裂解液全部转移到离心吸附柱中，直接离心。如果静置3-5分钟后再离心，会提高质粒产量10%左右。
4、室温14000g离心1分钟，弃穿透液。如果使用3-5mL起始菌液，则此步的离心时间可以延长1分钟以确保所有液体成功过柱，吸附柱中没有残留液体。
5、在离心吸附柱中加入700uL的通用洗柱液，室温14000g离心半分钟，弃穿透液。
6、室温14000g离心半分钟，甩尽残留液体。注意：此步不能省略。
7、将离心柱置于一个自备的1.5mL塑料离心管中，在离心柱中加入30-50uLDNA洗脱液2.0(对低拷贝质粒建议用30uL洗脱，对高拷贝质粒建议用50uL洗脱)。
8、室温14000g离心半分钟，离心管底溶液即质粒DNA，可以直接用于后续实验（浓度测定、酶切、电泳和测序）或放冰箱长期保存。
一步法质粒DNA提取（独家）注意：本方法提取的质粒DNA有如下特点：
1、因为没有使用剧烈的碱变性步骤，所以质粒呈现天然的超螺旋结构的比例较大。
2、由于整个操作非常快速，又没有使用碱来降解RNA，所以试剂中的RNase都来不及把细菌的内源RNA彻底降解，故所得质粒比碱变性法提取的质粒有更多的RNA污染，因此不建议使用测OD的方法确定质粒DNA的浓度，故最好采用电泳比较法，即通过比较质粒DNA跟浓度已知的DNAmarker的相对亮度来确定质粒的浓度。
一步法质粒DNA提取（独家）注意：RNA污染一般不影响电泳、酶切和测序。
3、如果需要进一步去除RNA污染，可以在第5步后再增加一步洗柱操作，即在离心吸附柱中加入300uL的通用洗柱液，室温14000g离心半分钟，弃穿透液，再进入下一步。
4、一般1-5mL菌液可以得到3-15ug（对低拷贝质粒）或5-35ug（对高拷贝质粒）质粒DNA。如果需要进一步提高质粒DNA产量，可以再加30-50uLDNA洗脱液2.0到离心吸附柱中再次洗脱，可以得到相当于第一次洗脱量10-20%的质粒DNA。也可以将第一次洗脱得到的质粒DNA溶液再加到离心吸附柱中洗脱，可以使质粒DNA产量提高10-20%。

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