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文献和实验
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保存条件 :常温运输和保存
保质期 :两年
英文名 :Column Fungal DNAout
库存 :860
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
柱式真菌DNAout产品及特点:真菌DNA提取是一个难题,一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种完全不同的结构形态,二是因为其细胞壁一般都很厚,比较难以破碎。本产品专门用于从真菌孢子和液体培养的真菌细胞中提取DNA。
它具有下列特点:
1.即开即用,提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2.既可以采取液氮研磨法破裂真菌,也可用玻璃珠法破碎真菌,两种方法均属于物理方法,远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好,也不容易带入外源真菌DNA(注:文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染,用于提取真菌DNA往往会造成污染)。
3.本方法提取一个样品只需要20余分钟,方便、快速和高效。
4.一次可以处理5mL的过夜真菌培养物,所得的基因组DNAOD260/OD280一般都在1.8左右,长度一般在20kb左右,每mL菌液的DNA产率一般在1-3ug。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。
柱式真菌DNAout运输及保存:
常温运输及保存,保存期为一年。
自备试剂:无菌水。
柱式真菌DNAout使用方法
1.收集菌体或孢子:
1.1、对菌液:取3-5mL过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中,12000rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。
1.2、对菌落:用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落(约50mg),转移到装有1mL自备无菌水的干净的塑料离心管中,洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。
1.3、对孢子材料,一般取0.1g左右,直接加入到塑料离心管中,然后进入下一步操作。
2.在上述真菌材料中加入自备的无菌水1mL,振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。此步用于洗涤菌体。
柱式真菌DNAout3.裂解真菌:
3.1、液氮研磨:在研钵中液氮研磨上述真菌材料成粉,然后转移到干净的离心管中,在离心管中加入500uL溶液A,常温涡旋震荡3分钟。
3.2、玻璃珠破碎法:在没有液氮的条件下,采用此法。在菌体沉淀中加入500uL溶液A和0.5克的玻璃珠,常温涡旋震荡10分钟。
4.在离心管中加入500uL溶液B,涡旋震荡3分钟,12000rpm离心2分钟,将上清液全部转移到一个5mL的干净的塑料离心管中。
5.在上清中加入3倍体积的溶液C,颠倒数次混匀后,分三次上离心吸附柱,每次上柱后均先室温放置2分钟,然后12000rpm离心1分钟,倒掉穿透液,再第二次上柱,重复上面的操作,直到挂柱步骤完成。
6.在离心吸附柱中加入500uL通用洗柱液,12000rpm离心1分钟,倒掉穿透液。此步可以洗涤掉杂质。
7.重复上步操作一次。
8.12000rpm空柱离心1分钟。
9.加入50-100uLDNA洗脱液2.0,室温放置1分钟以上,12000rpm离心1分钟,穿透液即为真菌DNA样品。
10.为了得到更多的DNA样品,可以重复上步操作1-2次。
11.所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。
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