大提柱式藻类RNAout

保存条件 ：常温运输和保存

保质期 ：两年

英文名 ：Column Algal RNAOUT

库存 ：100

供应商 ：上海烜雅生物科技有限公司

大提柱式藻类RNAout产品及特点：
本产品是xuanya开发的专门针对藻类RNA提取开发的高效RNA提取试剂。
大提柱式藻类RNAout该产品特点如下：
1. 操作更加简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
2. RNA纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数藻类中的多糖污染。
3. 适用于常见的各种海水和淡水藻类的RNA提取。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5. 性价比高于进口的柱式藻类RNA提取产品。


大提柱式藻类RNAout注：溶液 B 为淡黄色液体，使用前请观察颜色是否正常。若溶液 B 有油粒状颗粒及分层，属正常现象，不影响使用。

大提柱式藻类RNAout运输及保存：
常温运输和保存，溶液 B 需要 4℃保存，有效期一年。 自备试剂氯仿。

大提柱式藻类RNAout使用方法
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 样品破碎：
1) 匀浆法：先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在 RNALOCKER 中的植物组织需用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块)，放入 10-15 mL 塑料离心管中，加入 1 mL 溶液 A，然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2) 液氮研磨法（适用于复杂，易降解样品）：取适量新鲜植物组织放入 含液氮的研钵中，迅速将组织研磨成粉末后，将粉末转移到合适的塑 料离心管中，加入 1 mL 柱式植物 RNA 提取溶液 A，立即剧烈振荡 20 秒，充分混匀。 注意：溶解柱式植物 RNA 提取溶液 A 沉淀。柱式植物 RNA 提取溶液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转 移非液体的细胞碎片)。有的植物组织（比如果实）含有大量水份，匀浆液会多于 1 mL，转移时也只取 1 mL。
4. 在离心管中加入 0.3 mL 的柱式植物 RNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 自备氯 仿，在振荡器上振荡 30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟，两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞 破碎物。
6. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下 100 uL 上清液不取。
7. 加入等体积的柱式植物 RNA 提取溶液 C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生（对某些植物，属于正常现象），千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 将一半的溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到离心吸附柱中， 13000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 将剩下的一半溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到同一离心吸附柱中， 13000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第 7 步加入柱式植物 RNA 提取溶液 C 后有沉淀产生，则需要洗三次， 每次加入的通用洗涤液的量分别为 0.4、0.3 和 0.3 mL。
11. 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。
13. 13000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子 （BioTechniques，28：414，2000）。如果电泳发现 DNA 污染严重（跟样品相关）建议使用含有 RNase-free DNase 处理步骤的柱式植物RNAout 2.0， 也可以另购膜结合DNA清除剂升级成柱式植物 RNAout 2.0。
15. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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