服务名称 :miRNA靶基因验证服务
提供商 :锐博生物
锐博生物提供基于全人类基因组miRNA靶点验证的pmiR-RB-Report™靶基因3’UTR质粒载体,覆盖了人源的数百个基因。
pmiR-RB-Report™报告基因检测系统专门用来检测miRNA与靶基因是否可能存在调控作用,该报告系统报告荧光(hRluc),其下游构建了靶基因3’UTR区域,通过对该荧光的监测,即可验证miRNA对该靶标是否有调控作用;另有一校正荧光(hluc) 作为稳定内参,用于监测质粒表达效率。
将miRNA mimic与pmiR-RB-Report™报告基因质粒载体共转目的细胞系,通过萤火虫荧光素酶的活性分析,即可获得miRNA对潜在靶基因的调控作用的验证数据。
pmiR-RB-Report™报告基因质粒载体转录后可形成萤火虫荧光素酶与靶基因3’UTR区域组合而成的特殊mRNA,如果miRNA mimic能够与包含靶基因3‘UTR的mRNA互补结合,则荧光素酶的表达活性也收到显著调控,故通过检测荧光素酶的荧光强度即可定量分析miRNA对靶基因的mRNA调控效果。
由于pmiR-RB-Report™报告基因的3’UTR长度不一,大多数长度为1~2.5kb之间。一般建议构建长度不超过2.5kb,同时建议构建单位点突变载体。
将pmiR-RB-Report™ h-AKT1报告基因质粒载体(1ug)及hsa-miR-146a mimic (50nM)共转A549细胞系,采用双荧光素酶检测试剂盒检测结果表明hsa-miR-146a对AKT1 3‘UTR有显著调控作用。
将pmiR-RB-Report™ h-BCL2报告基因质粒载体(1ug)及hsa-miR-9 mimic (50nM)共转A549细胞系,采用双荧光素酶检测试剂盒检测结果表明hsa-miR-9对BCL2 3’UTR有较明显调控作用。
应用实例:
1)Yan Liang,Yuanyuan Li, Zhengli Li , Zhuo Liu, Zhiping Zhang, Shaoyan Chang, Jianxin Wu. Mechanism of folate deficiency-induced apoptosis in mouse embryonic stem cells: Cell cycle arrest/apoptosis in G1/G0 mediated by microRNA-302a and tumor suppressor gene Lats2.INT J BIOCHEM CELL B.Volume 44, Issue 11, November 2012(1750–1760).
1) 锐博生物针对人的几十个基因设计的pmiR-RB-Report™ 靶基因3‘UTR载体,您可以在线查询相应基因的载体,选择在线订购,并签字回传《产品订购单》 或 直接填写《miRNA产品订购单》,发至销售经理,确认下单;
2) 大部分基因的pmiR-RB-Report™ 靶基因3’UTR载体需要定制,请您在www.miRdb.org或www.targetscan.org查询相应的基因的3‘UTR,直接填写《miRNA靶基因3‘UTR订购合同》,发至销售经理,确认下单;
3) 定制时间依据具体基因及其3’UTR长度而定。