Transwell细胞迁移实验(威斯腾生物-中关村生物医学研发检测共享平台!)

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提供商 :威斯腾生物

服务名称 :Transwell细胞迁移实验

实验介绍
细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤:
1材料准备:
可拍照显微镜,Transwell小室,孔径8μm,没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用),Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套,BD公司的Matrigel,无血清DMEM,(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基,DMEM完全培养基,1640完全培养基(也可加到20%血清),无菌PBS,棉签,胰酶,4%多(CH2O)n固定液或者甲醇,结晶紫染液(0.1%(g/ml)PBS结晶紫)
2步骤和流程
2.1基质胶铺板:
用BD公司的Matrigel 1:8(根据细胞产生mmp的量来决定)稀释,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。
2.2制备细胞悬液
①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12-24h,进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。
②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,(用PBS洗1-2遍),用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml。
2.3接种细胞
①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。
②24孔板下室一般加入600µl含20%PBS的培养基,特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了,在种板的时候要特别留心,一旦出现气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板。
③培养细胞:常规培养12-48h(主要依癌细胞侵袭能力而定)。24h较常见,时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外,处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
2.4结果统计
直接计数法,“贴壁”细胞计数,这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后,可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去,通过给细胞染色,可在镜下计数细胞。
取出Transwell小室,弃去孔中培养液,用无钙的PBS洗2遍,甲醇固定30分钟,将小室适当风干。
0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍。
400倍显微镜下随即五个视野观察细胞,记数。
实验周期
1个月

实验服务流程

威斯腾生物服务项目
分子生物学类 蛋白质与免疫学 动物实验
实时荧光定量PCR 单克隆抗体制备 帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP) 多克隆抗体制备 抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术 Western-blot 实验服务 脊髓损伤模型
生化指标检测 蛋白双向电泳实验服务 脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测 原核蛋白表达纯化 骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP) 真核蛋白表达纯化 心肌缺血模型
GST pull Down ITRAQ定量蛋白质组学 心力衰竭模型
  SLAC蛋白组学 肺动脉高血压动物模型
    高血压模型
病毒类 实验课题整体外包 粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化 整体课题外包 大脑中动脉阻塞模型
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蛋白芯片 原代细胞培养 肝纤维化模型
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BioPlex悬浮芯片 软骨细胞培养 体内血栓模型
生长因子芯片 血管内皮细胞培养 关节炎模型
炎症因子芯片 神经元细胞培养 I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片 内皮组细胞原代培养 裸鼠成瘤
凋亡因子芯片   基因编辑动物
趋化因子芯片 电生理相关服务 动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 膜片钳实验  
细胞生物学 高通量测序 代谢组学
细胞原代培养 mRNA测序 气相色谱GC/MS
MTT检测 LncRNA测序 液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测 全基因组测序 核磁共震NMR
细胞周期检测 RNA-Seq测序  
细胞克隆形成实验 外显子测序 影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭 16s扩增子测序 Micro-CT
流式分选 Small RNA测序 小动物活体成像
CCK8/XTT检测 宏基因组测序 核磁共振
台盼蓝检测细胞活性 单细胞测序 PET-CT
药物筛选细胞学实验 circleRNA测序  
细胞粘附性检测 甲基化测序 基因编辑动物
细胞划痕实验   条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验   全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验    
病理类 CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 基因芯片
扫描电镜 基因定点突变细胞系 LncRNA芯片
透射电镜 单基因敲除细胞系 miRNA芯片
HE染色 多基因敲除细胞系 mRNA芯片
免疫组化 目的基因敲入细胞系 甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测 报告基因敲入细胞系 SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除细胞系  
免疫荧光    
Masson染色 CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 科研方案设计与SCI相关服务
原位杂交 基因敲除大鼠/小鼠 科研文献论著翻译
荧光原位杂交 基因敲入大鼠/小鼠 SCI论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)   临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测 药物筛选服务项目 药效学评价
水迷宫实验 高通量自动药物筛选平台 神经系统药物药效学评价
旷场实验 细胞高内涵药物筛选平台 抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测 蛋白质组学靶标研发平台 心血管系统药物药效学评价
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