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库存 :276
英文名 :Quant One Step qRT-PCR Kit(Probe)
保质期 :长期
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :50μl×50次
特别提示:包括一步法荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:一步法荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)
英文名称:Quant One Step qRT-PCR Kit(Probe)
产品货号:WH0102
产品规格:50μl×50次
本试剂盒是采用探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)进行Real Time One Step qRT-PCR的专用试剂。使用本制品进行Real Time One Step qRT-PCR反应可在同一反应管内连续进行,操作简单,并能有效防止污染。本反应体系由于可以对扩增产物进行实时检测,大大提高了检测灵敏度,并省略了PCR反应后的电泳步骤,非常适合于微量RNA的检测。
本试剂盒中使用了zuì适合于Real Time qRT-PCR的反转录酶Quant RTase和Hotmaster Taq DNA polymerase,保证了Real Time One Step qRT-PCR能稳定、高效的进行。Quant RTase是一种由工程菌进行重组表达的全新高效逆转录酶,具有与RNA高亲和性的特点,其能通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板,而Hotmaster Taq DNA Polymerase利用抑制剂通过温度调节方式封闭Hotmaster Taq DNA Polymerase的底物结合位点,温度低于40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动,因此zuì大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。
本试剂盒适用于探针一步法Real Time RT-PCR,可以准确简便的进行mRNA表达分析,尤其适合微量RNA的检测,适用于各种类型荧光定量PCR仪。本试剂盒可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对多种高低丰度的靶基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。
产品特点:
·可以快速、准确地对RNA病毒等微量RNA进行分析。
·在一管内连续完成反转录和定量PCR扩增,减少了多重操作污染的可能性。
·高效的反转录酶和热启动聚合酶保证扩增的高效率和高特异性。
·操作简便快速,减少加样过程中的体积损耗,保证结果的可信性。
·实验结果稳定、重复性好。
试剂盒组成:
组分 | 50μl×50次 |
2×Quant One Step RT-qPCR Mix(Probe)* | 1.3ml |
Hotmaster Taq Polymerase (2.5U/μl) | 130μl |
Quant RTase (for one step) | 40 μl |
RNase-Free ddH2O | 2×1 ml |
*内含dNTP Mixture、One step Probe RT- qPCR buffer、和ROX Reference Dye等。
储存条件:-20℃避光保存
适用的Real Time PCR扩增仪:
ABI PRISM 7000/7700/7900HT,7300/7500 Real-Time PCR System,7500 Fast
Real-Time PCR System (Applied Biosystems)
OPTICONTM/CFX96 (BIORAD)
Light Cycler480 (Roche)
Smart Cycler?
System (Cepheid)
Mx3000 P/Mx3005P (Stratagene)
Line-Gene (Bioer,杭州博日)
其他各种Real Time PCR扩增仪
注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.当同时需要进行数次Real Time One Step RT-qPCR反应时,应先配制各种试剂的混合液(其中包括2×Quant One Step RT-qPCR Mix (Probe)、RNase-free ddH2O、HotmasterTaq polymerase、Quant RTase、Primers、Probe等),然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
2.使用2×Quant One Step RT-qPCR Mix (Probe)时,应轻轻混匀,避免起泡,并在分取时慢慢吸取。
3.保存2×Quant One Step RT-qPCR Mix (Probe)或配制Real Time One Step RT-qPCR反应液时应避免强光照射。
4.反应液的配制、分装时请一定使用新的(无污染的)枪头或带滤心枪头、Microtube等,尽量避免污染。
5.制品只能使用特异性反转录引物,不能使用Random Primer和Oligo dT Primer等进行反转录反应。
操作步骤:
1.按下列组份配制50μl体系的RT-qPCR反应液(反应液配制请在冰上进行)
成分 | 使用量 | 终浓度 |
2×Quant One Step RT-qPCR Mix(Probe) | 25 μl | 1× |
Hotmaster Taq Polymerase(2.5U/μl) | 2μl | |
Quant RTase (for one step) | 0.7 μl | |
正向引物 | - | 0.25μM |
反向引物 | - | 0.25μM |
探针 | - | 0.2μM |
RNA模板 | - | |
RNase-Free ddH2O | 至50μl |
注意:
①通常引物终浓度为0.25μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可以在0.1-1.0 μM范围内调整引物浓度
②通常探针终浓度为0.20 μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可以在0.1-0.5 μM范围内调整探针浓度。
③建议在反应液中使用10pg~100ng的Total RNA为模板。
2.进行Real Time One Step RT-qPCR反应。
PCR反应管请用离心机瞬时离心后放入荧光定量PCR仪中进行Real Time PCR反应。建议采用下列图表显示的标准PCR反应程序,如果使用该程序得不到良好的实验结果时,再进行PCR条件的优化。
循环 | 步骤 | 温度 | 时间 | 内容 |
1× | 1 | 50℃ | 30min | 反转录 |
1× | 2 | 92℃ | 3min | 起始模板变性 |
(可选步骤)* 4×(touchdown) |
3 | 92℃ | 10sec | 变性 |
4 | 45-55℃ | 30sec | 退火 | |
5 | 68℃ | 1min | 延伸 | |
35-45× | 6 | 92℃ | 10sec | PCR循环中模板变性 |
7 | 50-60℃ | 20sec | 退火 | |
8 | 68℃ | 20sec | 延伸 |
3.实验结果分析。
反应结束后确认Real Time One Step RT-qPCR的扩增曲线,进行RT-qPCR定量时制作标准曲线等。
除了一步法荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法),,我公司还供应以下相关产品:
货号 | 名称 | 规格 |
BTN130911 | miRNA cDNA第一链合成试剂盒 | 25次 |
BTN130308 | 一管式双链cDNA合成试剂盒 | 10次 |
WE0145 | 实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料) | 5ml |
ALH190 | miRNA荧光定量PCR检测试剂盒 | 50μl×50次 |
SY0025 | PCR Master Mix (含染料) | 1ml |
SY0028 | 2×PCR Plus Master Mix(含染料) | 5×1ml |
SY0052 | 腺苷三磷酸溶液(100 mM)(ATP) | 1ml |
JN0006 | 一步法RT-PCR试剂盒 | 200次 |
JN0020 | Phi29 DNA聚合酶 | 125U |
JN0023 | 热启动Taq DNA聚合酶 | 250U |
JN0044 | 超敏快速基因组PCR扩增检测试剂盒 | 20μl×500次 |
QN0960 | 通用引物 Random | 250μl(10uM) |
GL1305 | 三磷酸腺苷溶液(ATP,10mmol/L) | 10ml |
QN2077 | 2×PCR Mastermix(SYBR Green) | 50T(1.25ml)|200T(5ml) |
WH0083 | dNTP混合液(2.5mM) | 1ml|5×1ml |
WH0210 | NGS文库富集试剂 | 24次|96次 |
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