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文献和实验
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库存 :368
英文名 :Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
保质期 :长期
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :500U
特别提示:包括末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)
英文名称:Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
产品货号:YT512
产品规格:500U
本酶是一种模板依赖的DNA聚合酶,可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3"羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的zuì短长度为3个核苷酸。
用途:寡核苷酸或DNA 3"羟基末端标记;DNA末端加尾(DNA tailing);5"-RACE;合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为小牛胸腺。
活性定义:37℃60分钟内,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3"羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件:200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNase。
酶储存溶液:100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v)glycerol 。
Reaction Buffer(5X):0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。
失活或抑制:70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
储存条件:-20℃。
使用说明:
1. DNA 3’末端标记:
a. 参考如下表格设置反应体系:
待标记DNA————————————————————10 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X) ——————————————10µl
[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol (3000Ci/mmol)————1.85 MBq (50µCi)
TdT (20U/µl) ——————————————————2µl
补充无核酸酶的去离子水 —————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明:标记的效率和3’羟基末端的类型有关,3’突出末端的标记效率要显著高于3’缩进末端或平末端的标记效率。
2. DNA末端加尾(DNA Tailing):
a. 参考下表格设置反应体系:
DNA片段 ————————————————————1 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X)——————————————4µl
dATP or dTTP——————————————————130pmol
或 dGTP or dCTP (四种中通常只需加入一种)————60pmol
TdT (20U/µl)——————————————————1.5µl
补充无核酸酶的去离子水—————————————至20µl
b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明:在上述反应条件下,每个3’羟基末端可以加上100-130个dA或dT,或20-30个dC或dG。
3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。
除了末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶),,我公司还供应以下相关产品:
货号 | 名称 | 规格 |
SV0004 | AbaSI限制性内切酶 | 1KU |
SV0170 | BsaXI限制性内切酶 | 500U|100U |
SV0220 | BsrBI限制性内切酶 | 5KU|1KU|500U |
SV0246 | BstAPI限制性内切酶 | 1KU|200U |
SV0439 | HpyCH4III限制性内切酶 | 1250U|250U |
SV0595 | PmeI限制性内切酶 | 2500U|500U|250U |
SV0598 | PmlI限制性内切酶 | 10KU|2KU|1KU |
SV0815 | I-SceI归位内切酶 | 2500U|500U |
SV0853 | Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶 | 500U|100U |
JN0068 | 热敏性磷酸酶(HSP) | 200U |
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