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文献和实验
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保存条件 ：-20℃
保质期 ：6个月
英文名 ：Enteroconcentric Escherichia coli (EAEC) nucleic acid detection kit (PCR-fluorescent probe method)
库存 ：850
供应商 ：上海烜雅生物科技有限公司
CAS号 ：细菌类(人相关）
规格 ：48T/50T
【产品名称】通用名称：肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
【包装规格】48T/盒
Name ：Enteroconcentric Escherichia coli (EAEC) nucleic acid detection kit (PCR-fluorescent probe method)
肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【检验原理】
本试剂盒采对指标基因设计特异性的引物和探针，用荧光 PCR 技术对指标的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【预期用途】
本试剂盒适用于检测动物腺、肝、脾、肺组织及人痰、血液等标本中分离出的指标，用于指标的定量检测辅助诊断。
【试剂组成】
| 名 称 | 规 格 |
| 核酸提取液 | 1.5mL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| 反应液 | 1.0mL×1 管 |
| 阳性质控品 | 50μL×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL×1 管 |
肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本
运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
组织样品：称取组织样品约 0.5g，置于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，匀浆后取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；
痰、尿液等液体样品：取 100μL 于灭菌离心管中；
血液样品：取抗凝血下层血细胞 50μL，加入 100μL 双蒸水吹匀。
DNA 提取
对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000
rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒
（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【使用方法】
样品处理（样本处理区）
样本前处理
组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；棉拭子取 100μL 进行提取。
【标本采集】
病死或扑杀猪，无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；生猪灭菌
棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中
【标本采集】
病死或扑杀猪，取分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等
试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 反应液 | 酶液 |
| 用量（样本数为 N） | 20μL | 1μL |
加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
PCR 扩增（核酸扩增区）
将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；
荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）
NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。
质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【参考文献】
国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1280-2003 国境口岸鼠疫检验规程[S].北京:科学出版社, 2003.
张志凯, 海荣, 蔡虹, 等. 鼠疫耶尔森菌的多重 PCR 检测方法[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2007.
吉林省质量技术监督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶尔森菌核酸的测定-荧光PCR 方法[S].
推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
患病动物：腺、肝、脾、肺组织、粪便、血液人：痰；尿液、血液
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【产品图片】
【生产企业】
企业名称：上海烜雅生物科技有限公司
生产地址：金海公路3265号14幢11546室
上海烜雅生物科技有限公司生产的肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)供应质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。
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本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。
肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)热销产品：
| Caspase 6 检测试剂盒 | XY-TE-1217 | 50 次 |
| Caspase 8 检测试剂盒 | XY-TE-1218 | 50 次 |
| Caspase 9 检测试剂盒 | XY-TE-1219 | 50 次 |
| Caspase 1 检测试剂盒 | XY-TE-1220 | 20 次 |
| 鲁米诺血迹鉴定试剂盒 | XY-TE-1222 | 100mL |
| 微量双链 DNA 定量试剂盒 | XY-TE-1230 | 1mL |
| 微量 RNA 定量试剂盒 | XY-TE-1231 | 1mL |
| 微量单链 DNA 定量试剂盒 | XY-TE-1232 | 1mL |
| 真空抽滤盒 | XY-TE-1234 | 1套 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装 ) | XY-TE-1249 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装长尖 ) | XY-TE-1251 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌 ) | XY-TE-1253 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌长尖 ) | XY-TE-1255 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌带芯 ) | XY-TE-1257 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌带芯长尖 ) | XY-TE-1259 | 96 支 |
| 200 μL RNase-free 黄吸头 ( 盒装 ) | XY-TE-1264 | 96 支 |
| 200 μL RNase-free 黄吸头 ( 盒装已灭菌 ) | XY-TE-1265 | 1000 支 |
| 200μLRNase-free 黄吸头 ( 盒装已灭菌带芯 ) | XY-TE-1267 | 96 支 |
| 1000 μL RNase-free 蓝吸头 ( 盒装 ) | XY-TE-1273 | 100 支 |
| 1000 μL RNase-free 蓝吸头 ( 盒装已灭菌 ) | XY-TE-1275 | 100 支 |
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