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文献和实验
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提供商 :上海派致生物科技有限公司
服务名称 :基于CRISPR/Cas9技术基因敲除(knock-out)细胞系定制
规格 :询价
基于CRISPR/Cas9技术基因敲除(knock-out)细胞系定制
技术简介
根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割,引起DNA双链断裂(Double-strand breaks, DSB),通过细胞自身的非同源末端修复(Non-homologous end joining, NHEJ)途径造成目的基因片段缺失或移码突变,进而实现目的基因敲除。
技术优势
1. 经多步优化的CRISPR/Cas9系统,适用于更广泛的哺乳动物细胞,提高了编辑率高,同时大大降低了脱靶效应。
2. 多种方案可供选择,满足不同研究需要。
实验流程
方案选择
方案 | 敲除效率 | 实验周期 | 优点 |
PiggyBac转座酶整合方案 | 高 | 短 | 操作方便 |
慢病毒感染方案 | 高 | 较长 | 能感染大部分难转染细胞 |
瞬时转染方案 | 低 | 较长 | 不整合外源基因到细胞基因组中 |
Base Editor方案 | 高 | 较长 | 不切割双链DNA,形成精确突变,产生提前终止密码子。 |
服务标准
客户提供:
1. 待敲除Gene ID;
2. 目的细胞(可选择由派致代购);
3. 完全培养基1-2 L(派致提供DMEM及1640常规培养基)。
派致交付:按方指定案构建的细胞系及项目报告。
交付周期:12-30周,具体时间取决于方案选择、敲除靶点复杂程度、细胞类型及生长情况。
上海派致生物科技有限公司
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