库存 ：60

保质期 ：6个月

供应商 ：上海康朗生物科技有限公司

保存条件 ： -80℃

规格 ：100μl/支

JM109(DE3)

JM109(DE3) Chemically Competent Cell 产品说明书

 

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产品规格 （CAT#: KL11070）

JM109(DE3)：                                             100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl
保存条件(保质期)：                             -80℃（6个月） 



基因型
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (r_k^-,m_k⁺) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F´ traD36 proAB laqI ^qZΔM15](DE3)



产品说明

JM109(DE3)菌株来源于JM109，用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于JM109的染色体上，所以称为JM109(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选试验。生产的JM109(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高于10⁸ cfu /μg DNA。



操作方法
1. JM109(DE3) 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或
    LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

● Sample Induction Protocol (for reference only)


1. Inoculate a single colony from a freshly streaked plate into 3ml of LB medium containing the appropriate antibiotic for the plasmid and host strain.
2. Incubate with shaking at 200 rpm at 37℃ overnight. 
3. Inoculate 50 ml of LB medium containing the appropriate antibiotic with 0.5 ml of the overnight culture prepared in step 2(use the 500 ml triangular flask as the container would be better).
4. Incubate with shaking at 150 rpm at 37℃ until the OD 600 reaches 0.5-0.8. (0.6 recommended; about 2.5h).
5. (Optional)Pipet 1ml of  the cultures into clean microcentrifuge tubes and  place the tubes on ice until  needed  for gel analysis or storage at  -20℃. These will serve as the non-induced control samples.     
6. Add IPTG to a final concentration of 1 mM. Optimal time for induction of the target protein may vary from 2-16 hours, depending on the protein.
7. Incubate with shaking at 120 rpm at 37℃ for 2-4 hours. To determine the optimal time for induction of the target protein, it is recommended that a time course experiment be performed varying the induction from 2-16 hours.
8. Place the culture on ice for 10 minutes. Harvest cells by centrifugation at 5,000×g for 10 minutes at 4℃.
9. Remove the supernatant and store the cell pellet at -20℃ (storage at lower temperatures is also acceptable). 




IPTG配制：
1 M（mol/L）IPTG（分 子 式: C9H18O5S，分 子 量: 238.30）溶液：称取 2.38 g  IPTG固体，加入8ml ddH2O溶解
补足水到10 ml用0.22um 滤膜过滤除菌，分装即可。


注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。
4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。