小鼠气管和支气管上皮细胞规格

品系 ：详见说明书

ATCC Number ：MouseAirway:NormalBronchialandTrachealEpithelialCells

细胞类型 ：详见说明书

肿瘤类型 ：详见说明书

CAS号 ：详见说明书

供应商 ：上海谷研

库存 ：27

注册证号 ：详见说明书

英文名 ：MouseAirway:NormalBronchialandTrachealEpithelialCells

生长状态 ：贴壁；悬浮

年限 ：详见说明书

运输方式 ：常温运输/干冰运输

器官来源 ：详见说明书

是否是肿瘤细胞 ：详见说明书

细胞形态 ：详见说明书

免疫类型 ：详见说明书

物种来源 ：人/小鼠/大鼠/其他

相关疾病 ：详见说明书

组织来源 ：详见说明书

规格 ：1.2ML/1.5ML

小鼠气管和支气管上皮细胞规格服务特点：
1. 细胞纯度高：原代分离得到的目的细胞最高纯度可达到95%以上；
2. 细胞活力强：原代分离的细胞一般不能长久传代，提供P0-P3代的细胞，活力达80%以上，无污染；
3. 多种鉴定方式：可根据需求提供流式细胞检测、免疫细胞化学、Realtime PCR及蛋白印迹等多种检测方法。
小鼠气管和支气管上皮细胞规格【MouseAirway:NormalBronchialandTrachealEpithelialCells】
      产品描述：呼吸道上皮细胞是由纤毛、无纤毛和能分泌黏液的细胞按照从近端到远端呼吸道分布的混合细胞群组成。这类细胞的各个亚型细胞各具特点，从而不仅能形成物理屏障，可有效的防止多种有毒物质，而且通过产生和分泌大量化学介质和细胞因子形成高度复杂的宿主防御系统。支气管上皮由表面的上皮细胞和粘液腺体组成。表面的上皮细胞由基细胞，杯状细胞和纤毛细胞三种细胞构成，形成了基底柱状结构，并能清除粘液纤毛。用支气管上皮细胞培养分化诱导纤毛表型的研究显示，IL-4和IL-13的刺激能改变增殖、纤毛运动、黏液分泌等一系列细胞功能。支气管上皮细胞增殖以及其它细胞过程也部分受到EGF受体信号的调节。支气管上皮细胞的培养为我们研究这类细胞的功能和病理生理机制提供了一个体外模型。公司提供的小鼠气管和支气管上皮细胞，均来自新鲜组织。细胞的培养采用公司专利产品小鼠气管和支气管上皮细胞培养试剂盒(MouseAirway PrimaCell™:NormalBronchialandTrachealEpithelialCells CatNo.3-4064)来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞（如脂肪细胞、纤维细胞等）的污染，同时保证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下，小鼠气管和支气管上皮细胞可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
      发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司提供的细胞有标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右完全培养基；2、说明书及注意事项；3、公司售后服务标准。
      保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。

实验试剂：
1、小鼠气管和支气管上皮细胞规格培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement
2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO
3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S
4、染色液： 0.4% Trypan Blue
5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit
6、检测试剂：鼠抗人及大鼠desmin一抗，肌球蛋白（myosin）单克隆抗体
实验操作：
1、 小鼠气管和支气管上皮细胞规格新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块；
2、 将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织
3、 向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化；
4、 反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min；
5、 弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d换液，以后每天换液1次。
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原代细胞分离：
一、小鼠气管和支气管上皮细胞规格细胞培养
1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
二、原代细胞分离
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。
三、细胞增殖检测技术
目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂
的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。所以最直接的证据应该采用方法一。
其中常见检测：CCK8检测法 ，MTT检测法，Brdu检测法，Edu检测法，平板克隆形成。
四、细胞周期检测技术
细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。
常用的方法：流式检测细胞周期，标记有丝分裂百分率法。
五、细胞凋亡检测
常见检测方法：流式检测细胞凋亡，线粒体膜电位，活性氧检测，Hoechst染色，电镜，TUNEL。
六、细胞转移能力检测
常见检测方法：细胞划痕实验，Transwell实验，Invasion实验