克隆载体：AAV-CRISPR敲除、修复

提供商 ：莱德盟生物

服务名称 ：克隆载体：AAV-CRISPR敲除、修复

    莱德盟生物载体库涵括了腺相关病毒Recombinant Adeno-Associated Virus（AAV）及慢病毒Lentivirus（LV）所有常用功能的入口载体，全部为长期从事科研工作的莱德盟生物科学家团队精心设计的增强型或全新功能载体。为确保克隆载体有清晰可靠的序列信息以及后续病毒包装的成功，莱德盟生物仅提供基于莱德盟生物的定制入口载体库的定制克隆服务。
 

  AAV-CRISPR敲除、修复（A/B/C/D/E/F/G/H系列）

     AAV-CRISPR敲除、修复共分为4种类别，分别是SpCas9/SpCas9HF（A、B系列）、SaCas9/ SaCas9HF（C、D系列）、AAV-CRISPR基因激活（E系列）、NmCas9, AsCpf1, LbCpf1（F、G、H系列）。
 

    (1) SpCas9/SpCas9HF（A、B系列）

        SpCas9是第一个被鉴定的CIRSPR核酸酶，其PAM为NGG，基因长达4.2Kb（详细介绍请参阅AAV-CRISPR系统）。莱德盟生物以小于300 bp的EFS（EF1a短版本）启动子或miniCMV启动子（180 bp）驱动SpCas9，使序列总长度不超过 AAV的长度限制 5Kb。

    特点：

   A. 使用经过优化的sgRNA scaffold，能提高切割效率约40%；

   B. SpCas9HF: SpCas9高保真度版本。K848A，K1003A，R1060A突变的SpCas9，据报道脱靶现象接近零，而切割活性与野生型无显著降低[；

   C. A1为SpCas9及sgRNA表达盒处在同一载体的一体化载体。使用比U6启动子更小但活性并无显著减弱的H1启动子(100 bp)，因此能将sgRNA的表达盒与SpCas9放入同一载体[；

   D. A2为无sgRNA表达盒的单独SpCas9载体，可根据需要置换EFS启动子成410 bp以下的启动子；

    E. A3~A27为U6-sgRNA表达盒，带有EFS或EF1或CAG启动子驱动的mCherry、Cre、mCherry-2A-Cre、RenillaLuciferase-2A-Cre、ZsGreen、EGFP、EGFP-KASH。
 

  SpCas9定制sgRNA长度：19-20 nt



SpCas9HF定制sgRNA长度：19-20 nt


（注意：此为H1启动子，无需以5’G开头；SpCas9高保真版本对任何不匹配碱基敏感，因此由于U6启动子的需要而添加基因组上不存在的5’G会大大降低切割活性）。