聚合酶（GsmartI Taq DNA Polymerase）

库存 ：100

英文名 ：GsmartI Taq DNA Polymerase

CAS号 ：详询

保质期 ：详询

供应商 ：AZENTA安升达

保存条件 ：-20℃

规格 ：100ul/200ul/500ul

产品内容：

产品组成	GWP101S	GWP101M	GWP101L
	500 U	1000 U	2500 U
WizsmartTM Taq DNA Polymerase	100 μL	200 μL	500 μL
10X Taq PCR Buffer	2 mL	3 mL	8 mL

货号：GWP101
浓度：5 U/μL
保质期：36个月
保存条件：-20℃
产品简介：
Wizsmart^TM Taq DNA Polymerase是通过将编码Thermus aquaticus DNA polymerase基因的质粒转化到大肠杆菌，经诱导表达后分离纯化获得，其分子量约为94KD。该酶有5′-3′DNA聚合酶活性和5′-3′外切酶活性，但无3′-5′外切酶活性。经检测无外源核酸酶的污染和宿主DNA的残留，扩增效率高，稳定性好，适合用于常规的PCR扩增和菌落PCR。
主要应用

• PCR快速扩增
• 菌落PCR
• 扩增的DNA片段可用于TA克隆

扩增能力：

• 延伸速度：2-6kb/min
• 简单模板，如以λDNA为模板，30秒的延伸时间可以有效扩增3kb片段，4分钟的延伸时间可以有效扩增不超过8kb片段
• 复杂模板，如以人基因组为模板，可以有效扩增不超过3kb片段。
• 扩增产物3’端突出一个“A”碱基，可直接用于T载体克隆

活性单位定义：
75℃、30min内催化15 nmol脱氧核糖核酸生成非酸解物质的酶量定义为一个活性单位，即1 U。
使用指导：

1. 推荐反应体系：

成分	常规PCR		菌落PCR
10× Taq Buffer	3 μL	5 μL	3 μL
dNTP (10mM each)	0.3 μL	0.5 μL	0.3 μL
Forward primer✲（20 μM）	0.3 μL	0.5 μL	0.3 μL
Reverse primer✲（20 μM）	0.3 μL	0.5 μL	0.3 μL
模板DNA✲✲	X μL	X μL	0.5-3 μL
WizsmartTM Taq DNA Polymerase	0.3 μL	0.5 μL	0.3 μL
灭菌ddH2O	补水至30μL	补水至50μL	补水至30μL

说明：
✲：推荐的引物终浓度为0.2μM，但可以根据需要在0.1-0.5μM范围内变化。
✲✲：常规PCR模板为质粒、基因组等；菌落PCR模板为菌液，通常加入3μL菌液作为模板，例如可以将单克隆于96孔深孔板（200μL LB/孔）在37℃摇床振荡培养1-3h后吸取3μL菌液即可作为模板，如果是过夜培养的菌液，通常0.5μL即能满足菌落PCR需求，过多菌液可能会导致PCR产物电泳挂孔，甚至导致PCR失败。

1. 将反应管上下颠倒混匀数次，尽量避免产生气泡，最后使用微型离心机离心后置于PCR仪进行扩增反应；
2. PCR反应程序：

步骤	温度 (℃)	时间	循环数
预变性	95	4 min	1
变性	94	30 s	25-35✲✲
退火	X✲	30 s
延伸	72	Y✲✲✲
终延伸	72	5-10 min	1
保存	4	＋∞	1

说明：
✲：建议以一对引物中Tm较低的引物Tm-5℃作为退火温度；
✲✲：菌落PCR通常25个循环即可，对于模板量较低的PCR扩增，循环数可以增加到
35个循环。
✲✲✲：延伸时间Y可以参考下表确定：

扩增子长度 (kb)	扩增速度 (kb/min)
0-3	3
3-8	2

可能遇到的问题及解决办法：

1. 无扩增产物或扩增效率低

1. 重复一次，排除操作误差
2. 检查引物是否因储存不当降解
3. 模板是否储存时间太长或是反复冻融导致降解；
4. 模板GC含量是否过高，过高可在反应体系中添加DMSO或甜菜碱等变性剂；
5. 延长延伸时间
6. 增加扩增循环数
7. 优化退火温度
8. 如果PCR体系模板量较低（譬如30μL反应体系模板量为1amol质粒），降低酶的使用量可能提高扩增产物的量，可以尝试将酶的加入量降低至标准量的1/4-1/2；

1. 出现非特异性扩增或smear带：

1. 引物特异性差，引物与模板有非特异性结合，必要时重新设计引物
2. 模板被污染或降解：重新制备模板
3. 减少酶用量
4. 缩短延伸时间
5. 减少循环数
6. 降低引物浓度