细胞内钙离子荧光探针（Fluo-4 AM）

库存 ：102

英文名 ：Intracellular calcium fluorescence probe

保质期 ：6个月

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：-20℃

规格 ：25微升

本品是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一.用于细胞内钙离子检测时，Fluo-4 AM的常用浓度为0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-4 AM的适当溶液和细胞一起在20-37℃孵育10-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-4 AM在细胞内充分转变成Fluo-4。本Fluo-4 AM(钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液，浓度为2mM。

分子式：C51H50F2N2O23
分子量：1096.95

Fluo-4 AM在Fluo-3 AM的基础上改进而成，其特点是加载更快并且在相同条件下荧光更加明亮。Fluo-4 AM将Fluo-3 AM结构中的氯原子替换成了氟原子，导致它的最大激发波长会向短波长处偏离12nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长488nm，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度会比Fluo-3强一倍。由于Fluo-4与钙离子的亲和力和Fluo-3相近，所以使用上和Fluo-3也基本相同，可以使用激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪等荧光检测仪器来测定细胞内钙离子浓度的变化。Fluo-4 AM和Fluo-3 AM的结构式参考下图。



Fluo-4 AM是Fluo-4的乙酰甲酯衍生物，是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-4 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-4 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内。Fluo-4可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494nm，最大发射波长为516nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为512-520nm。Fluo-4的激发光谱和发射光谱参考下图。



注意事项：
1. Fluo-4 AM遇水极易分解，建议第一次使用时，母液分装并密封保存，同时注意保持干燥。
2. Fluo-4 AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
3. 探针的工作浓度、细胞量、孵育温度和时间等需要根据不同实验预先摸索。
4. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

储存条件：-20℃，有效期6个月。