人类RTK磷酸化抗体芯片

一、实验原理
该芯片采用夹心法，其原理是将捕获抗体预先固定在固相载体上，生物样品加入到芯片上一起孵育反应后，其特异性的抗原与捕获抗体结合，然后加入生物素标记的检测抗体一起孵育，最后通过HRP-链霉亲和素与化学发光底物、或者荧光染色剂-链霉亲和素结合作为信号检测。基于“三明治”双抗体夹心法建立的芯片，高品质的抗体对是此方法的关键，夹心法有很高的灵敏度，检测浓度可以低至1-10 pg/mL;每增加检测一个蛋白，芯片上就需要增加一个抗体对，这样可能出现交叉反应，因此需要将每个抗体对与芯片上其他抗体对进行检测，验证是否可以引入这个抗体对，且不对其他抗体对检测造成干扰，通过优化筛选将交叉反应降到最小。

由于抗体对之间可能存在的相互影响，夹心法抗体芯片一次性检测蛋白的数量有所限制，但是可以用于蛋白的定量检测。目前，RayBiotech验证配对的抗体对有大于600种抗体对，基于双抗体夹心法开发的半定量芯片有40多种，定量抗体芯片有大于45种，涵盖的因子450多个，包括炎症因子、凋亡因子、生长因子、肥胖因子、血管因子、信号转导磷酸化、白介素等等各个疾病相关的因子。夹心法芯片具有特异性好、灵敏度高、重复性和稳定性好的优点。

二、实验原理图：