结肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物

品系 ：详见说明书

ATCC Number ：Human Colon MatchPair: Normal Colonic Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives

细胞类型 ：详见说明书

肿瘤类型 ：详见说明书

CAS号 ：详见说明书

供应商 ：上海博湖

库存 ：44

注册证号 ：详见说明书

英文名 ：详见说明书

生长状态 ：贴壁/悬浮

年限 ：详见说明书

运输方式 ：常温运输/干冰运输

器官来源 ：详见说明书

是否是肿瘤细胞 ：详见说明书

细胞形态 ：上皮样/成纤维样/其它

免疫类型 ：详见说明书

物种来源 ：人/小鼠/大鼠/其他

相关疾病 ：详见说明书

组织来源 ：详见说明书

规格 ：详见说明书

公司的结肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物质量佳，发货速度快，售后有保证。可支持各大院校先发货
细胞描述
结肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物人结肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人原代结肠上皮细胞和肿瘤细胞中提取的，人原代结肠上皮细胞和肿瘤细胞分别从正常人结肠组织和肿瘤组织中制备。正常人结肠组织和肿瘤组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5% PMSF，-80度保存。
潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
细胞传代： 
结肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物1. 显微镜下观察细胞，神经干细胞悬浮成“神经球”生长，通常情况下，每两天换液一次，每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中，将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟，收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶，在超净工作台中轻轻吹打10次，注意不要消化太久，消化的目的是缩小神经球的体积，不要消化能单个神经干细胞，那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基，吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后，去掉上清，用新鲜培养基重悬细胞，按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏： 
1. 结肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物 取出冻存管后，投入37℃水浴中，震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心（1000rpm，5 min）。
4. 弃去上清，再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基，转入培养瓶中培养。
细胞冻存：液氮冻存（冻存液：DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO）。
细胞运输：干冰运输（冻存管）/ 常温运输（T-25培养瓶）
细胞鉴定：神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态，放大倍数为200x，右图为nestin染色后的荧光图片（绿色），放大倍数为200x。
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间甲基红/对二甲氨基偶氮苯间羧酸/3-((4-(二)苯基)偶氮)苯/对二甲偶氮苯/m-Methyl red;IND;25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;20691-84-3;RT，避光
邻菲啰啉/1，10-菲罗啉/邻菲罗啉/邻啡啰啉/1,10-菲啰啉/邻二氮杂菲/ 2,9-二甲基啉菲罗啉/新铜试剂/1,10-菲咯啉一水合物/1,10一二氮杂菲/1,10-Phenanthroline hydrate;AR，99%;5克国产;5144-89-8;RT
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玫瑰红三羧酸铵/铝试剂/玫红三羧酸铵/5-[(3-羧基-4-苯基)(3-羧基-4-氧代-2,5-环-1-亚基)甲基]-2-苯三铵盐/金精三羧酸铵/金红三铵/2-(亚水杨基氨基)酚/水杨叉邻氨基酚/缩邻氨基酚/Aluminon;AR;25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;569-58-4;RT，避光
猪脱氧胆酸Hyodeoxycholic acid83-49-8含量：≥98.0%
牛肉浸膏Meat extracts beef68990-09-0含量：≥98.0%
三号胆盐Bile salt No. 373163-53-8含量：≥98.0%
氢化卵磷脂(大豆)HSPC92128-87-5含量：≥98.0%
胰蛋白示Tryptose含量：≥98.0%
hDPSCs, 人前磨牙牙髓干细胞
CWbRL 刺毛鼠肺成纤维样细胞
KIRREL3 Others Mouse 小鼠 KIRREL3 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-M116小鼠视网膜色素上皮细胞完全培养基100mL
卵巢上皮细胞培养基OEpiCM-prf
EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMYM 人真皮微血管内皮细胞完全培养基 100mL
CL-0074DLD-1(人结肠腺癌细胞)5×106cells/瓶×2
FCGR3B Others Human 人 CD16b / FCGR3B CHO细胞裂解液 (阳性对照)
EndoFectagen? 内皮细胞转染试剂盒
牛陀螺状细胞;BT 鸡淋巴瘤细胞，DT40细胞 Kert-3细胞，小鼠肾癌细胞
EB病毒转化的人B淋巴细胞(傣族);KM9403
FABP4 Others Mouse 小鼠 FABP4 / ALBP 人细胞裂解液 (阳性对照)
结肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物hDPSCs, 人前磨牙牙髓干细胞
CWbRL 刺毛鼠肺成纤维样细胞
KIRREL3 Others Mouse 小鼠 KIRREL3 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-M116小鼠视网膜色素上皮细胞完全培养基100mL
卵巢上皮细胞培养基OEpiCM-prf
EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMYM 人真皮微血管内皮细胞完全培养基 100mL
结肠上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮，因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换；而是每 2 到 3 天加料一次，直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞，然后继续培养扩增，或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞，将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。