小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒【Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells】

品系 ：咨询在线客服

ATCC Number ：Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells

细胞类型 ：咨询在线客服

肿瘤类型 ：咨询在线客服

供应商 ：上海抚生

库存 ：37

生长状态 ：贴壁

年限 ：咨询在线客服

运输方式 ：复苏/冻存

器官来源 ：咨询在线客服

是否是肿瘤细胞 ：咨询在线客服

细胞形态 ：贴壁

免疫类型 ：咨询在线客服

物种来源 ：咨询在线客服

相关疾病 ：咨询在线客服

组织来源 ：咨询在线客服

CAS号 ：咨询在线客服

英文名 ：Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells

注册证号 ：咨询在线客服

规格 ：1.25ML/1.5ML

产品说明
小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒【Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells】
小鼠皮下脂肪细胞主要存在于结缔组织中，能够合成和贮存脂肪。成熟的脂肪细胞呈圆形，胞浆内富含脂滴。其中，脂肪细胞在脂类代谢，能量平衡以及抵抗炎症等方面起重要作用，与肥胖，高血脂、糖尿病、乳癌等多种生理疾病密切相关。小鼠皮下脂肪细胞传5代仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。 利用本公司试剂盒中提供的皮下组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的皮下组织能使得皮下组织中脂肪细胞的一些功能特性发生改变，从而将脂肪细胞分离开来。本试剂盒适用于分离培养小鼠皮下脂肪细胞。本体系提供了最佳的组织分离条件，分离单个细胞的效率是已出版文献中所报道的5~6倍。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以最大程度地降低所培养的脂肪原代细胞中成纤维细胞的含量。 小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒适合于培养小鼠的皮下脂肪细胞。本试剂盒包含： （1）OptiTDSTM小鼠皮下脂肪细胞组织解离液（3×1ml） （2）小鼠皮下脂肪细胞组织处理缓冲液（100ml） （3）FibrOutTM小鼠皮下脂肪细胞成纤维抑制剂（1ml（500X）） （4）小鼠皮下脂肪组织洗液（5 x 100 ml） （5）小鼠皮下脂肪细胞生长因子（1ml500X）及血清（5x10ml） （6）小鼠皮下脂肪细胞基础培养基（5 x 100ml） （7）小鼠皮下脂肪组织预备液（1 x 100 ml） （8）小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒使用说明书
实验报告
一、小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒【Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells】分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
传代细胞培养
小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒【Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells】(一)原理：体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。
细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。细胞接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力最好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。

(二)操作：
1.将长成单层的原代培养细胞或HeLa细胞从二氧化碳培养箱中取出，在超净工作台中倒掉瓶内的培养液，加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜)，静置5～10分钟。
2.在倒置镜下观察被消化的细胞，如果细胞变园，相互之间不再连接成片，这时应立即在超净台中将消化液倒掉，加入3～5ml新鲜培养液，吹打，制成细胞悬液。
3.将细胞悬液吸出2ml左右，加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液，盖好瓶塞，送回二氧化碳培养箱中，继续进行培养。
(三)结果:一般情况，传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2～4天就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代。
原代细胞培养
小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒【Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells】(一)原理：细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。
(二)操作：
1．取材：用颈椎脱位法使乳兔迅速死亡。然后，把整个动物浸入盛有75％乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。用消过毒的剪刀剪开用   和乙醇再次消毒后的皮肤，剖腹取出肝脏或肾脏。置于无菌平皿中。
2．切割：用灭菌的PBS液将取出的脏器清洗三次，然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎，直到成1mm3左右的小块，再用PBS清洗，洗到组织块发白为止。移入无菌离心管中，静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。
3．消化、接种培养：吸取0.25％胰蛋白酶一0.02％   混合消化液1ml，加入离心管中，与组织块混匀后，加上管口塞子，37℃水浴中消化8～10分钟，每隔几分钟摇动一下试管，使组织与消化液充分接触，静止，吸去上清，向离心管中加入5～10ml含5％小牛血清的MEM培养基，用吸管吹打混匀，移入二个培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。
(三)结果：细胞接种后一般几小时内就能贴壁，并开始生长，如接种的细胞密度适宜，5天到一周即可形成单层。
小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒【Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells】相关产品：
人总前列腺特异抗原(tPSA)ELISA试剂盒 英文名称：Human total prostate s pecific antigen,tPSA ELISA Kit进口/分装
人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA试剂盒英文名称：Human Podocalyxin,PCX ELISA Kit特价供应
人组胺(HIS)ELISA试剂盒英文名称：human Histamine，HIS ELISA Kit 特价促销
人组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA试剂盒英文名称：Human histon-H2b ELISA Kit进口/原装
人组织蛋白酶D(cath-D)ELISA试剂盒 英文名称：Human cathepsin D,cath-D ELISA Kit进口/分装
人组织蛋白酶K(cath-K)ELISA试剂盒 英文名称：Human Cathepsin K，cath-K ELISA Kit特价促销小鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA试剂盒      组装/原装
小鼠热休克蛋白90(HSP-90)ELISA试剂盒      组装/原装
小鼠热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒      组装/原装
小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒      组装/原装         
DNA连接酶3抗体,特价促销,请询价
磷酸化DNA依赖性蛋白激酶抗体,特价促销,请询价
DNA聚合酶δ2/DNA pol δ 2抗体,特价促销,请询价
DNA聚合酶δ催化亚单位/DNA pol δ cat抗体,特价促销,请询价
DNA聚合酶η抗体,特价促销,请询价
DNA聚合酶γ/DNA pol γ抗体,特价促销,请询价
DNA聚合酶ι/DNA pol ι抗体,特价促销,请询价
DNA聚合酶κ/DNA pol κ抗体,特价促销,请询价
DNA聚合酶λ/DNA pol λ抗体,特价促销,请询价
小鼠皮下脂肪细胞培养试剂盒【Mouse FatPrimaCell: Normal Subcutaneous Fat Cells】Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH8.0  　250mL　Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH8.0  　
Raffinose Solution（棉子糖溶液）,20% 　250mL　Raffinose Solution,20% 　
Regular Washing Solution,5X　250mL　Regular Washing Solution,5X　
RIPA Buffer with EDTA & EGTA 　250mL　RIPA Buffer with EDTA & EGTA 　
RIPA Buffer with EGTA 　250mL　RIPA Buffer with EGTA 　
RIPA Buffer with EGTA 　250mL　RIPA Buffer with EGTA 　
RIPA Buffer with Triton, 1X　250mL　RIPA Buffer with Triton, 1X　
RIPA Buffer without SDS 　250mL　RIPA Buffer without SDS 　
RIPA Buffer—2 　250mL　RIPA Buffer—2 　
RIPA without SDS with EDTA 　250mL　RIPA without SDS with EDTA 　
RNase-Free Phosphate Buffered Saline (无RNase的PBS), 10X 　250mL　RNase-Free Phosphate Buffered Saline, 10X 　
RNase-Free SSC（无RNase的SSC）,20X  　250mL　RNase-Free SSC,20X  　
RNase-Free SSPE（无RNase的SSPE）,20X,pH7.4  　250mL　RNase-Free SSPE,20X,pH7.4  　
RNase-Free Tris-HCl Solution（无RNase的Tris-HCl溶液）,1M,pH7.4  　250mL　RNase-Free Tris-HCl Solution,1M,pH7.4  　
RNase-Free Tris-HCl Solution（无RNase的Tris-HCl溶液）,1M,pH8.0  　250mL　RNase-Free Tris-HCl Solution,1M,pH8.0