尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)

库存 ：157

英文名 ：Uracil-N-Glycosylase(UNG)

保质期 ：长期

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：-20℃

规格 ：200U|1000U

特别提示：包括尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)
英文名称：Uracil-N-Glycosylase(UNG)
产品货号：WE0115
产品规格：200U|1000U

  尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)也称为尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)，通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，该蛋白分子量为25kD，可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，并且对RNA无活性，主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为：在PCR反应中以dUTP代替dTTP，扩增产物片段中的T全部被U取代，形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键，降解反应体系中含U的DNA，有效消除PCR产物的残留污染，大大降低扩增产物污染导致的假阳性，从而保证扩增的特异性和准确性。

活性定义：37℃，60分钟内催化1 nmol尿嘧啶，从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。

质量控制：SDS-PAGE检测纯度大于95%；经检测无核酸内、外切酶活性。

注意事项：
1、UNG长期储存(非频繁使用; 每月少于3次)请置于-70℃保存，每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融，大包装建议分装使用。
2、UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子，一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一，使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测，T-DNA仍会积累，此抗污染系统也难以起到完全的作用。
3、UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施，为了防止PCR产物的污染，尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时，必须严格规范实验室的划分和操作。

使用方法：
以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法，实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
Taq PCR Buffer，10×	5μl	1×
dATP，10 mM	1μl	200μM
dGTP，10 mM	1μl	200μM
dCTP，10 mM	1μl	200μM
dTTP，10 mM	0.5μl	100μM
dUTP，10 mM	1μl	200μM
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	Xμl
Taq DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
Uracil-N-Glycosylase，1 U/μl	0.2μl	0.2 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

2、反应条件

步骤	温度	时间	循环数
UNG消化	37℃-50℃	5-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	94℃	30 s	30-40个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	1 kb/min
终延伸	72℃	5 min

注意：通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中，先于37℃-50℃范围内消化5-10分钟，然后95℃ 10分钟灭活，(同时这一步也达到预变性和热启动的效果)，随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃-50℃，5-10分钟的范围内变化，可以根据实验的需要进行调整。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

除了尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),，我公司还供应以下相关产品：



名称：核酸酶/RNA/DNA清除剂(喷雾清除剂)
货号：YT402
规格：250ml
本品是一种高效清除实验仪器、设备、材料固相表面的RNase和DNase等核酸酶污染的无毒喷洒型试剂，主要用于创造洁净的DNase和RNase Free操作环境；同时，本产品还能清除环境中DNA和RNA的污染。

本产品能有效清除RNase、DNase、RNA和DNA，具体的使用效果优于进口品牌同类产品对RNase、DNase、DNA和RNA的作用效果。

本产品使用比较安全，无毒性，但略有腐蚀性，在某些用途方面是一种非常安全的DEPC替代品。

本产品使用便捷。使用时直接将本产品均匀喷洒于固体表面，约5分钟后用洁净纸巾擦拭干净即可进行后续的实验操作。本产品适用于实验仪器设备如PCR仪、离心机、移液器、实验台、试管架、离心管架、电泳槽等，及实验耗材如离心管、枪头、手套等表面核酸酶污染的清除，对于塑料制品、乳胶制品、玻璃制品、不锈钢制品均有效。

注意事项：
1）本产品每次使用后应当拧紧喷头，保证本产品的密闭保存，避免长时间接触空气，以免影响使用效果。
2）使用本产品清除实验器材等表面的核酸酶污染后，仍需注意戴手套、口罩等进行操作，以免工作环境和样品被污染。
3）本产品用于仪器设备时，仅限于仪器设备表面可以擦拭清洗的地方，严禁本产品流入仪器设备内部，以免影响或破坏仪器设备的正常运行。

储存条件：室温密封，有效期一年。

名称：高保真DNA聚合酶
货号：SY0036
规格：100U
Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。

本产品中附带的5×Phanta SF反应缓冲液对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO或MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品特点：
• 保真度是Taq DNA Polymerase的52倍
• 扩增速度是常规聚合酶的4-150倍
• 广泛的模板适应性
• 优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板，便于快速得到理想的扩增结果
• 提供PCR Enhancer以帮助扩增高GC含量的模板
• 提供即用型的预混液，最大程度地减少实验步骤

产品组份：
5×SF Buffer(with 10mM MgSO4)：1.25 ml
25 mM MgSO4：1 ml
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
DMSO：100 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
储存条件：-20℃。

质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng人基因组DNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。