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文献和实验
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库存 :大量
英文名 :总外泌体捕获和定量试剂盒说明书(尿液)
保质期 :12个月
供应商 :上海钰博生物科技有限公司
保存条件 : 2-8℃下保存
规格 :盒
总外泌体捕获和定量试剂盒说明书(尿液)产品介绍外泌体提取和纯化是外泌体研究的第一步,接下来,除了外泌体鉴定外,外泌体定量也是下游实验前的重要一环。目前,外泌体定量主要通过NTA(纳米颗粒追踪实验)来实现,应用较多,即通过溶液中颗粒的光散射来测定颗粒的浓度和不同粒径分布,但不能区分外泌体和微囊泡与其它颗粒的区别,可以通过外泌体和微囊泡质膜染色,通过荧光NTA(fNTA)能够准确测定溶液中外泌体的浓度;另外,也可以通过流式细胞仪测定外泌体浓度等,这些方法操作复杂,成本较高,需要昂贵的仪器设备。外泌体ELISA(EXO-ELISA),即外泌体捕获和定量试剂盒,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)技术,酶标板预包被有抗外泌体表面抗原的抗体,可直接捕获样品和标准品中外泌体颗粒,然后加入Biotin标记的检测抗体,洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP),洗涤后,加入显色底物液TMB,避光显色。
EXO-ELISA,可简单、快速捕获和分离特异的的总外泌体或外泌体亚群,并且通过外泌体标准品,可测定样本中外泌体的浓度;使用较为方便,既可以检测同一样本中外泌体多个蛋白质的表达,又可以筛选大量样本中某一蛋白质的表达变化
总外泌体捕获和定量试剂盒说明书(尿液)保存与应用
【保存条件】
本试剂盒室温下运输,室温或 2-8℃下保存 12 个月(按照试剂盒不同成分分别保存),使用前请充分混匀。【应用范围】
本产品只用于科学研究,不能用于临床诊断。本试剂盒提取的外泌体可用于 NTA 粒径分析,Western Blot,核酸提取及其后续分析(Q-PCR,测序等),不建议用于外泌体标记和蛋白质质谱分析等。
总外泌体捕获和定量试剂盒说明书(尿液)产品介绍
外泌体(Exosome)是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡
(Extrocellular Visicles,EVs)。外泌体普遍存在于多种体液中,其内容物丰富,包括蛋白质、脂质和核酸等,在细胞间信息交流中发挥着重要作用,主要参与免疫抗原呈递,神经递质传递,脂类代谢及细胞信号转导等过程,并与多种疾病的发生、发展、治疗及预后密切相关。
密度超速离心作为传统并有效的外泌体分离方法,但其复杂的操作流程,昂贵的仪器设备,限制了外泌体的常规研究。本公司研制一种外泌体提取试剂,通过优化多聚物混合物与样品混合,经离心可将外泌体沉淀富集,其操作简单,用时短,结果稳定,污染蛋白含量较少,只需普通离心机就可以分离得到较纯的完整外泌体。
总外泌体捕获和定量试剂盒说明书(尿液)试剂盒组成和说明
本试剂盒只适用于血清或血浆的外泌体提取。成分 Cat# EXORG50A-1 | 体积 | 数量 | 保存条件 |
外泌体提取试剂(Exosome Extraction Reagent) | 10ml | 50 次 | 2-8℃ |
样品稀释液(Sample Solution) | 20ml | -- | 2-8℃ |
纯化柱(Filter Spin Columns)/1.5ml 收集管 (Collection Tubes 1.5ml) |
-- | 50 套 | RT |
成分 Cat# EXORG30A-1 | 体积 | 数量 | 保存条件 |
外泌体提取试剂(Exosome Extraction Reagent) | 4mL | 30 次 | 2-8℃ |
样品稀释液(Sample Solution) | 10ml | -- | 2-8℃ |
纯化柱(Filter Spin Columns)/1.5ml 收集管 (Collection Tubes 1.5ml) |
-- | 30 套 | RT |
样品类型 | 样品体积 | 外泌体提取试剂用量 |
血清或血浆 | 100μl | 50μl |
血清或血浆 | 250μl | 125μl |
- 样本预处理
- 沉淀外泌体
30min,管底可见白色沉淀,吸去上清,1,500×g,4℃离心 5min,完全去除残留液体,注意不要破坏外泌体沉淀。
- 外泌体重悬
- 外泌体纯化
将重悬的外泌体转移至纯化柱,放入1.5ml收集管(试剂盒提供,事先已放好)中,2,000×g,4℃离心 5min,弃掉纯化柱,收集管中为提取的外泌体,提取的外泌体可直接应用于下游实验(如,粒径分析、核酸提取等),或者储存在2-8℃保存一周,或者-80℃保存大约三个月。
将重悬的外泌体转移至纯化柱,放入 1.5ml 收集管(试剂盒提供,事先已放好)中,2,000×g,4℃离心 5min,弃掉纯化柱,收集管中为提取的外泌体。提取的外泌体可直接应用于下游实验(如,粒径分析、核酸提取等),或者储存在 2-8℃保存一周,或者-80℃保存大约三个月。
上海钰博生物科技有限公司
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