Phi29 DNA Polymerase

保质期 ：1年

保存条件 ：-20°C

供应商 ：华因康

库存 ：大量

规格 ：5000U-10000U

概述
Phi29 DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力，同时具有3'→5'外切酶校读功能，还具有特殊的链置换和连续合成特性。

应用
1.恒温protein-primed DNA扩增。
2.利用随机引物扩增DNA。
3.滚环复制。
4.复制extended-region。

来源
从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，使用大肠杆菌表达和纯化Phi29 DNA聚合酶。

活性单位定义
在30°C条件下，10min内能使0.5 pmol 的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。

贮存条件
-20℃贮存。

热失活
650℃ 10min。

质量控制
考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90％，并无内切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。

应用
滚环复制方法：
第一步：样品（菌液或质粒）准备： 第二步：混合样品和其他反应物：

样 品	1μl
10×反应缓冲液	5μl
100μM随机引物	1μl
ddH2O	预留第四步需要加入组分的体积，最终反应体积50μl

第三步：90℃变性5min，立即置于冰上冷却。
第四步：加入dNTP 1-2μl、100×BSA 0.5μl、Phi29 DNA Polymerase 0.2-1μl。
第五步：扩增反应：30℃，反应12-16h。
第六步：失活反应：65℃，反应10min。
第七步：检测扩增效果：选用酶切位点唯一的内切酶进行酶解反应，再用琼脂糖凝胶电泳检测扩增效果。