TNFβ

TNFβ

价格: ¥1000 - 2000

品牌:上海烜雅

货号:XY-KT-3017

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产品详情

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免疫原 :详见说明书

亚型 :IgG

形态 :Lyophilized or Liquid

保存条件 :避光-20℃,保存一年

克隆性 :详询

标记物 :详询(烜雅可供应生物素、酶、荧光素标记的抗体)

适应物种 :h,R,m,r,d

保质期 :一年

抗原来源 :Polypeptide

目录编号 :XY-KT-3017

级别 :生产厂家

库存 :100

供应商 :上海烜雅生物科技有限公司

宿主 :Rabbit,mouse

应用范围 :ih,wb

浓度 :1mg/ml

靶点 :详见说明书

抗体英文名 :TNFβ

抗体名 :TNFβ

规格 :100-200ul

TNFβ抗体产品资料:
适应物种:h,R,m,r
级别:生产厂家
纯度:>95%
浓度:1mg/ml
分子量:详见说明书
形态:Lyophilized or Liquid
克隆类型:Polyclonal
规格价格:请直接联系我司客服详询
说明书:请直接向我司客服索取

免疫组化常见问题及对策
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理,检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的 分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛,成为生物学和医学众多学科 的重要研究手段。作为初次使用本公司的抗体从事免疫组化的客户可能遇到许多问题,大体 归纳起来,主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他 一些小问题。现在就以上几点分别说明。
非特异性着色
非特异性着色就是在理论着色区域外的着色,这种着色与背景是有区别性的。

 主要原因:
  1. 标本原因,肝肾内源性生物素含量高,与 SABC 结合导致非特异性着色,皮肤肺组织胶 原含量高,由于胶原带负电荷,易吸附试剂导致非特异性着色。
  2. 切片干涸导致的边缘效应。
  3. 抗体浓度过高。
  4. 组织在处理中存在出血区域坏死区。
  5. 洗涤不充分。
  6. 显色剂氧化,显色时间长。
解决方法:
  1. 一抗应做浓度梯度,选择阳性强,背景好,信躁比高的浓度,作为抗体实验浓度;二抗浓 度和时间一般不变。
  2. 稳定实验条件,严格按操作说明进行。
  3. 在实验中应保持切片始终处于水平状态避免抗体流失,避免切片干涸。
  4. 在实验中应将试剂覆盖面积大于切片面积。
  5. 洗涤要充分,在背景十分深时,可用 37℃预温的 PBS 浸泡
  6. 防止显色剂的氧化,尤其是配制显色剂使用的容器,最好是灭菌过的;显色时间应在显微 镜下严格控制。

着色部位不对
情况一:本是胞浆抗原有着色,但实验结果显示在胞核有着色。

原因及解决办法:
  1. 修复时间过长,修复条件十分严苛,这时应降低反应强度,减少修复时间。
  2. 组织在二中静置时间过长,这时应更换标本。
  3. 抗体中含有抗核蛋白抗体,这种情况已不多见。
  4. )标本原因,标本处理不慎会导致总在同一个地方出现着色。
情况二:本是胞核抗原但显示结果却在胞浆。

原因及解决办法:
  1. 核抗原不易暴露,需用热修复或延长修复时间来充分暴露。
  2. 蛋白质是在胞浆翻译的,再转运至其他部位,所以出现浆着色也属正常。

情况三:本是胞膜抗原但显示结果却是在胞浆和胞膜都有着色。


原因:蛋白质是在胞浆翻译的,再转运至其他部位,处于转运过程中的膜蛋白有可能显示在胞浆。
假阳性
如不加一抗也有阳性信号
主要原因:
二抗引起的交叉,球蛋白是一个超家族,哺乳动物种属来缘近的容易发生交叉反应。如:羊 抗兔抗体可与兔标本中球蛋白反应,二抗羊抗小鼠也可与大鼠,小鼠中的球蛋白起反应,尤 其在修复的情况下。
无阳性

主要原因:
1.抗原稳定性问题,由于许多蛋白质半衰期短易被破坏,如 P53 半衰期只有 30 秒而 PCNA 等抗原稳定。
           2.标本制作过程中烤片时间过高时间过长,标本制作不规范。
           3.实验中漏加试剂,实验操作不规范。
解决方法:
  1. 在标本固定中应该严格操作,做到及时固定。
  2. 在浸蜡时温度不要太高,时间不要过长。一般 2 小时×2 次。烤片温度一般在 60℃左右 30 分钟。
  3. 实验中要严格按照实验步骤操作。在所做指标既有单抗又有多抗时,要将一抗和二抗严格 对应。
阳性弱


原因及解决方法:
  1. 一抗浓度过低,解决方法:提高一抗浓度
  2. 孵育时间过短,解决方法:按说明书严格操作
  3. 抗体流失,解决方法:补加抗体
  4. 显色时间过短,解决方法:在显微镜下控制反应时间
  5. 抗原修复方法不当,抗原修复有许多种方法,如:修复、消化,不消不修,寻找适合的方 法是解决阳性弱的有效方法之一

其他问题及注意事项
  1. 在实验中尤其在修复后切片容易脱片,切片脱片的原因是什么?
 答:切片原因有以下几点。1.切片没有经过防脱片处理。2.在切片后没有及时烤片。3.修复 时间过长。
  1. DAB 中 A 液无颜色或颜色很深是否影响实验结果?
答:DAB 的颜色深浅一般不影响实验,因为 DAB 中含有保护剂,每一批保护剂的颜色都不 太一样,好的 DAB 颜色变深一般与氧化剂的存在有关
 
  1. 冬天气温低洗涤不充分,可能出现背景高, 应对方法用 37℃欲温 PBS 洗涤
  2. 抗体是否能做兔标本 答:以说明书为准,一般能做人、大鼠、小鼠也可能做兔,这是由于种属亲缘关系决定的

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