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文献和实验
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免疫原 :详见说明书
亚型 :IgG
形态 :Lyophilized or Liquid
保存条件 :避光-20℃,保存一年
克隆性 :详询
标记物 :详询(烜雅可供应生物素、酶、荧光素标记的抗体)
适应物种 :h,m,r
保质期 :一年
抗原来源 :Polypeptide
目录编号 :XY-KT-2914
级别 :生产厂家
库存 :100
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
宿主 :Rabbit,mouse
应用范围 :ih,wb
浓度 :1mg/ml
靶点 :详见说明书
抗体英文名 :NMDAR2D
抗体名 :NMDAR2D
规格 :100ul-200ul
NMDAR2D产品资料:适应物种:h,R,m,r
级别:生产厂家
纯度:>95%
浓度:1mg/ml
分子量:详见说明书
形态:Lyophilized or Liquid
克隆类型:Polyclonal
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说明书:请直接向我司客服索取
Western Blotting 内参抗体的选择
在 Western Blotting 中使用内参,就是在试验中用内参对应的抗体检测内参蛋白。内参 就是内部参照,一般是指管家基因编码表达的蛋白,它们在各个组织和细胞中的表达相对恒 定,常用在检测蛋白的表达水平变化时做参照。
利用 Western Blotting 可比较在组织细胞蛋白上样等量时,不同条件或不同组织细胞中 目的蛋白的表达量,特别是当目的蛋白表达量不高时,上样量的的差别就极可能影响结果的 分析。因此,在 Western Blotting 试验中,进行内参的检测,可以校正蛋白质定量、上样过 程中存在的误差,保证实验结果的准确性;此外,内参可作为空白对照,检测蛋白转膜是否 完全、整个 Western Blotting 显色发光体系是否正常。目前,在国内外发表的文章中,Western Blotting 作内参校正已成为一种惯例。
内参抗体种类很多,比如 β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、Lamin B、PCNA、Na+/K+ ATPase 等,下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则:
一、样本种属来源
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择 β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、PCNA、 Na+/K+-ATPase 等。
植物来源实验样本,则可以选择 Plant actin、Rubisco 等。
其他来源样本研究较少,所以就应该参照文献报导,选择合适的蛋白作为内参。
- 目的蛋白分子量
- 目的蛋白表达部位
胞核蛋白:PCNA 等
核膜蛋白:Lamin B 等
胞膜蛋白:Na+/K+-ATPase 等
线粒体蛋白:COX IV、VDAC1 等
以上几条原则只是针对通常情况,但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实 际的试验环境。比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致 GAPDH 的表达增 高,不适合做内参;比如在在凋亡实验时,Lamin 等也不适合作为内参。因此设计实验方案 的时候应该考虑这些因素并查询相应文献,也应该注意内参表达出现异常,。
- 烜雅生物提供了多种内参蛋白抗体,帮助客户选择最合适的内参蛋白抗体。
β-Actin
Actin 即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin 大致可分为六种,其中四种是不 同肌肉组织特异性的,其余两种广泛分布于各种组织中,包括 β-actin 和 γ-non-muscle actin。 针对大多数组织和细胞来说的,β-actin 作为内参是公认的,它由375个氨基酸组成,分子量 大小为42KD 左右,广泛分布于细胞浆内,表达量非常丰富,其含量占所有细胞总蛋白的50%。 但是在某些特殊的情况下,如脂肪组织或细胞内,β-Actin 的表达量就很少。
实验图例:
Tubulin
Tubulin 即微管蛋白,是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin 分为 α、β、γ、δ、ε 等多种 tubulin, 其中 α-Tubulin 和 β-Tubulin 可以形成异源二聚体,也是形成微管的最主要的两种 Tubulin。 α-tubulin 和 β-tubulin 分子量分别为55kDa 和50kDa,其实际检测条带均在55kDa 左右。作 为内参,β-tubulin 的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于 Western Blotting,其作 为上样量是否一致的参照,也常被用于免疫染色,观察细胞的微管结构。
实验图例:
GAPDH
GAPDH 即甘油醛-3-磷酸脱氢酶,是参与糖酵解的一种关键酶,催化糖酵解的第六步, 它还参与核转录、DNA 复制和修复以及细胞凋亡等。它由4个30-40kDa 的亚基组成,分子 量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH 基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛 用作 Western Blotting 的内参。但请注意,某些生理因素,如缺氧和糖尿病,会增加 GAPDH 在 特定的细胞和组织的表达。
实验图例:
PCNA
PCNA 即增殖细胞核抗原,因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名,以后的研 究发现 PCNA 与细胞 DNA 合成关系密切,在细胞增殖的启动上起重要作用,是反映细胞增 殖状态的良好指标。它在细胞核内合成,并存在于细胞核内,由261个氨基酸组成,分子量 为29KD。
实验图例:
Lamin B
Lamin B 即核纤层蛋白 B, 是凋亡关键因素 Caspase 家族的作用靶子,受 Caspase 的 剪切而活化,位于核膜。其由 586 个氨基酸组成,分子量为 66KD。
实验图例:
Na+/K+-ATPase
Na+/K+-ATPase 即 Na+/K+-ATP 酶或 Na+/K+-ATP 泵,它会使细胞外的 Na+浓度高于细 胞内,当 Na+顺着浓度差进入细胞时,会经由本体蛋白质的运载体将不易通过细胞膜的物 质以共同运输的方式带入细胞。其由 1023 个氨基酸组成,分子量为 113KD。
实验图例:
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