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文献和实验
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TIANSeq 高保真 PCR 反应预混液
TIANSeq HiFi Amplification Mix 是一种新型高保真 PCR 扩增预混液,可用于 DNA 的高保真快速扩增,如基因表达克隆、基因定点突变、基因组点突变的分析(SNP)等;更可用于高通量测序中,如高保真基因组 DNA 文库的富集。
产品特点:
- 扩增快速:延伸速度可达 10-15 sec/kb。
- 延伸力强:可扩增长至 20 kb 的 DNA 片段。
- 特异性好:具有热启动功能,可用于多重 PCR。
- 灵敏度高:模板用量可低至 10 pg。
- 偏好性低:针对不同 GC 含量的模板都有均衡的扩增效果。
- 应用广泛:可用于高通量测序文库的 PCR 扩增和其他 PCR 相关的克隆和检测。
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实验例:
使用分子信标法(Ma et al., Anal Biochem, 2006)检测不同高保真酶的热启动性。所有产品均宣传其具有热启动能力,但检测结果表明这些产品中只有 UltraHiFi 在 95 度时才被激活,其余产品在 40-50 度时均有链退火和延伸能力。 |
不同酶的保真性 使用 Lac I 法检测酶的保真性。TIANGEN UltraHiFi 的保真性是普通 Taq 酶的 50 倍以上。 |
使用 UltraHiFi 酶 (A)、国外 TK 公司 (B) 和 N 公司 (C) 高保真酶、国内 V 公司 (D) 和 TR 公司 (E) 高保真酶分别扩增不同来源、不同长度的片段。结果显示,UltraHiFi 在扩增能力、特异性、普适性、长片段扩增效率方面的综合性能表现最优。 M:TIANGEN D15000 Marker 1:人类基因组 DNA 模板 (750 bp) 2:人类基因组 DNA 模板 (1 kb) 3:人类基因组 DNA 模板 (2 kb) 4:人类基因组 DNA 模板 (4 kb) 5:人类基因组 DNA 模板 (6 kb) 6:人类基因组 DNA 模板 (1915 bp,GC 70.4%) 7:大鼠基因组 DNA 模板 (2 kb) 8:水稻基因组 DNA 模板 (2 kb) 9:小麦基因组 DNA 模板 (2 kb) 10:大肠杆菌基因组 DNA 模板 (2 kb) 11:大鼠基因组 DNA 模板 (8 kb) 12:大鼠基因组 DNA 模板 (8 kb) 13:大鼠基因组 DNA 模板 (8 kb) 14:Lamda DNA 模板 (15 kb) |
使用 UltraHiFi 酶用不同延伸时间扩增不同长度的片段。结果显示,对于小于 4 kb 的片段,延伸速度可达 5 sec/kb,长片段可适当延长延伸时间,使用 30 sec/kb 的时间可扩增 15 kb 以上片段。 M:TIANGEN D15000 Marker |
使用 UltraHiFi 酶扩增不同起始浓度和长度的片段,UltraHiFi 至少能够识别 1 ng 基因组 DNA 模板和 1 pg 的质粒模板。 A:M:TIANGEN 1 kb DNA ladder。1-7:人类基因组 DNA 模板。加入量分别为 1000 ng,500 ng,100 ng,50 ng,10 ng,5 ng,1 ng。 B:M:TIANGEN Marker III。1-6:4.5 kb 质粒 DNA 模板。加入量分别为 100 ng,10 ng,1 ng,100 pg,10 pg,1 pg。 |
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