比色法检测整体甲基化水平

提供商 ：云序生物

服务名称 ：比色法检测整体甲基化水平

规格 ：按样品数目收费

技术简介
m6A/m5C RNA甲基化整体水平鉴定
N6-methyladenosine (m6A)，是一种腺嘌呤核苷酸在腺苷酸甲基转移酶催化下发生的修饰，普遍分布于不同类型的RNA中。m5C RNA是近年来发现的一类在tRNA及rRNA中高丰度存在的一种甲基化修饰。众所周知，RNA甲基化在RNA的可变剪切、转录起始和翻译中发挥重要作用。RNA甲基化水平与新陈代谢﹑遗传发育﹑疾病发生发展等生物学过程密切相关。

云序生物优势
(1) 灵敏高：
起始RNA量低至100 ng；
(2) 特异性高：
严格设置的阳性/阴性对照，结果更加准确可信；
(3) 稳定性高：
背景信号极低，结果更加简单稳定；
(4) 速度快：
比色分析，方便和快速；

实验原理
比色法RNA甲基化定量检测试剂盒提供了定量检测总RNA甲基化水平的试剂。采用类似ELISA的方法：将实验样本与RNA甲基化标准品用RNA高结合溶液结合到孔底，然后添加捕获抗体和检测抗体检测样品中的m6A/m5C，通过微孔板读取仪（如酶标仪）检测。从孔中测得的信号或OD值与样本中RNA甲基化的数量成正比，并且样本中RNA甲基化的量可以通过预先设定的RNA甲基化标准品来实现定量检测。

实验步骤

图注：RNA甲基化定量检测试剂盒（比色法）操作步骤

实例展示
使用尿液样本m6A定量检测试剂盒(比色法)来定量人类尿液不同体积中m6A的含量。

 

样本要求
样品类型
组织、细胞、体液、总RNA。其它类型样品请详询。
样品量
a) 细胞：2×10⁶ 
b) 组织：50-100 mg
c) 体液：全血 1 mL, 血清、血浆 2 mL
脑脊液：3 mL
尿液：20 mL
d) 总RNA：1 μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5; 无明显降解，电泳检测样品特征性条带完整清晰，无明显弥散或拖尾)
样品运输及保存
样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。
样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存;血液样品应使用EDTA抗凝，不可用肝素；RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。


参考文献
1. m6A Demethylase ALKBH5 Maintains Tumorigenicity of Glioblastoma Stem-like Cells by Sustaining FOXM1 Expression and Cell Proliferation Program 期刊：Cancer Cell 影响因子：22.84
2. METTL14 suppresses the metastatic potential of hepatocellular carcinoma by modulating N6 -methyladenosine-dependent primary MicroRNA processing  期刊：Hepatology 影响因子：14.08