超快血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)

库存 ：287

英文名 ：Total RNA Fast Extraction Kit From Blood

保质期 ：一个月

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：室温，有效期12个月。(裂解液RLS需4℃)

规格 ：20次|50次

特别提示：包括超快血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：超快血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)
英文名称：Total RNA Fast Extraction Kit From Blood
产品货号：ALH007
产品规格：20次|50次

本试剂盒本试剂盒适用于快速提取全血（液体样本）高纯度总RNA。采用改进的异硫*酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA 酶， 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫*酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异*醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独特的RLS裂解液配方，可直接裂解全血，不需要先裂解去除红细胞。
4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

产品组分：

组份	20次	50次
裂解液RLS	25ml	50ml
去蛋白液RE	15ml	25ml
漂洗液RW	5ml	10ml
Rase-free H2O	10ml	10ml
70%乙醇	4ml RNase-free H2O	9ml RNase-free H2O
吸附柱	20个	50个
收集管（2ml）	20个	50个

注意事项：
1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2. 所有离心步骤如未加说明，均在室温进行。使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
3. 裂解液RLS和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯*，用户使用前需要自备氯*。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb
（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时，RNA样品应该溶于TE后检测，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。
7. 加入裂解液RLS后，加氯*前，样品可在–60℃-70℃ 保存一个月以上。
8. 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留, 在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA 残留（一般电泳EB 染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA 表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 处理。
4) 在步骤去蛋白液RE 漂洗前，直接在吸附柱 上进行DNase I 消化处理。

储存条件：室温，有效期12个月。(裂解液RLS需4℃避光保存)

本制品别名：血液总RNA快速提取试剂盒|液体样本总RNA快速提取试剂盒

除了超快血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法),血液总RNA快速提取试剂盒|液体样本总RNA快速提取试剂盒，我公司还供应以下相关产品：



名称：动物RNA提取试剂(TRIzol)
货号：BTN3070
规格：100mL
本试剂盒是类似于TRIzol、基于异硫*酸胍/酚/氯*提取原理的快速总RNA提取试剂，可用于从各种动物组织(包括白细胞)和部分植物材料中快速提取总RNA。

产品特点：
1. 操作简单快速，只要10分钟左右，可以全在室温下进行。
2. RNA 质量高，OD260/OD280一般在1.9左右。一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
3.适用于大部分实验材料，如培养细胞、各种动物材料和少数植物材料。植物RNA的提取最好使用植物RNA提取试剂盒。
4. 性价比高于进口TRIzol和TRI Reagent等同类产品。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：下面的操作步骤是用1mL 本产品进行的微量提取的，细胞使用量一定要准确，不能超过下述用量，否则将超出本产品的裂解能力，RNA产量将急剧降低。如果样品量大，请按比例增加各成份的用量。RNA 工作环境最好用高效无毒的固相RNase清除剂(BTN3080)彻底处理。
1. 对贴壁细胞(10 平方厘米)：吸尽培养液，加入1mL的本产品用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移至干净的1.5mL塑料离心管中，进入第6 步。
2. 对悬浮细胞(五百万至一千万个)：离心收集细胞，吸尽液体，加入1mL本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的1.5mL塑料离心管中，进入第6 步。
3. 对新鲜组织(50-100mg)：将新鲜组织剪切成小块，放入10mL或15mL塑料离心管中，加入1mL的本产品，用Polytron 剪切式匀浆器冰上匀浆30秒左右，将匀浆液转移至新的1.5mL塑料离心管中，进入第6步。注意：对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，使用量不要超过30-50mg，否则十分容易产生DNA污染。对10mg以下的组织，最好加入本公司的微量RNA 助沉剂。
4. 对RNAhold 保存的组织(50-100mg)：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同第3 步。RNAhold处理后的组织韧性很强，匀浆时间需要适当延长。
5. 对液氮中保存的组织(50-100mg)：在研钵中研磨成粉，加入1mL 本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的1.5mL塑料离心管中，进入第6 步。
6.在装有裂解物/匀浆物的1.5mL塑料离心管中加入0.2mL自备氯*，振荡器上充分振荡混均30秒。注意：一定要把官底的溶液震荡起来，否则只是液面的振动。
7. 13000-15000g室温离心3分钟。
8. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下50-100μl上清液不取。
9. 对脂类丰富的组织(如脂肪组织和脑组织)，需再重复氯*抽提一到两次以让氯*充分去除脂类分子。
10.在上清液中加入等体积的异*醇，振荡器上振荡30秒混匀。
11. 13000-15000g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果组织使用量低于10mg或需要提高RNA 回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。
12.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
13.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡混匀30秒。
14. 13000-15000g室温离心1分钟。
15.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
16. 重复第13-15的洗涤步骤一次(也可以省略)。
17. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。注意不要吸弃RNA
沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的后续使用。
18.室温放1-2分钟后立即加入50-100μl RNase-free 水使RNA沉淀溶解。
千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA 将变得十分难溶。RNA样品可以立即使用或存放于-80℃待用。
注意：由于RNase-free 水没有主动灭活残留RNase的功能，而任何方法提取的RNA 都可能有残留的RNase，所以强烈建议客户使用本公司推出的具有主动灭活残留RNase 功能的、同时跟后续RT-PCR等反应兼容的液相RNase 清除剂(BTN3091)。

附一：RNA 完整性的电泳检测(仅供参考，本产品不含相关试剂)
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE缓冲液或超快核酸电泳液进行常规电泳，但文献报道必须使用RNAload这样的变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用，否则RNA容易降解。
动物RNA电泳后应该在UV下呈现三条清晰的rRNA 带，28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA 条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示RNA 有降解(因为大的RNA 被酶降解的可能更大)。
跟动物一样，植物果实和种子的RNA一般有三条电泳带，但植物叶片的RNA 有四条或更多rRNA带，多余的RNA 来源于叶绿体。
如果电泳发现RNA样品中有DNA污染(一般是使用过多样品造成)，可分别用非酶DNA 清除剂或RNase-free DNase 清除。

附二：RNA产量和纯度测定(仅供参考，本产品不含相关试剂)
用pH在7.5-8.2的TE缓冲液将5-10μL RNA稀释10-20倍后在OD260和OD260测光吸收，通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。RNA的产率还随组织的营养状态和组织的种类不同而不同，一般来说，代谢旺盛的组织(如肝脏和肾脏)RNA的产率高，代谢不旺盛的组织(如肌肉和脂肪组织)RNA的产率低，下面是常见动物组织的RNA产率:
肌肉，胎盘和脑组织: 1-2μg RNA/mg 组织
肝，胰和肾组织: 5-10μg RNA/mg 组织
培养细胞: 5-15μg/10E6细胞
RNA的纯度通过OD260/OD280 来确定，一般在1.8-2.1之间即算合格。但即使低于此范围，一般也不会影响RT-PCR等反应。
蛋白质污染可以通过酚/氯*抽提一次然后酒精沉淀去除，多糖污染可以用多糖清除剂去除。