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文献和实验
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免疫原 :详见说明书
亚型 :IgG
形态 :详询
保存条件 :避光-20℃,保存一年
克隆性 :详询
标记物 :详询
适应物种 :详见说明书
保质期 :一年
抗原来源 :详见说明书
目录编号 :XY-MY-0152
级别 :生产厂家
库存 :100
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
宿主 :Rabbit,mouse
应用范围 :详见说明书
浓度 :1mg/ml
靶点 :详见说明书
抗体英文名 :详询
抗体名 :兔抗豚鼠IgG
规格 :100-200ul
{概述}产品名称:兔抗豚鼠IgG
蛋白长度:详询
来 源:详见说明书
偶 联 物:详询
应 用:详见说明书
浓 度:1mg/ml
说 明 书:请直接向我司客服索取
请务必查看说明书,获取具体的保存建议。我们不对保存不当的抗体负任何责任。如果保存和处理得当,大部分抗体的活性都可保留数月,甚至若干年。
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以下是我司研究员整理的建议希望能帮到您
为了防止微生物污染,可将NaN3加入抗体制备物中,NaN3的最终浓度为 0.02% (w/v)。我们的多款抗体中都含有这种保护剂,其浓度范围为 0.02%-0.05%。数据表的保存缓冲液部分将对此进行说明。
不使用NaN3的情况
如果要用抗体对活细胞进行染色或处理,或者要用抗体进行体内研究,请务必使用不含NaN3的制备物。这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用:它会阻断细胞色素电子传递系统。
NaN3会干扰涉及胺基的所有偶联反应,因此必须在进行偶联反应之前将其去除。完成偶联反应之后,可使用NaN3保存抗体。另一种可用的抗菌剂是 0.01% (硫柳汞),这种物质不含伯胺。
抗体溶液中的NaN3可通过渗析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da(IgM 约为 600,000 Da),NaN3的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微渗析装置可使叠氮化物顺利扩散出去,而抗体得以保留。
渗析过程在烧杯中(置于磁力搅拌器上,温度保持 4 ℃)进行,每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS,搅拌渗析装置 6 小时。更换 PBS 两次,每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能,所有材料都应灭菌,并且应在无菌条件下处理所得制备物。
去除NaN3的实验方案
将NaN3从抗体溶液中去除的具体步骤NaN3是一种用于抑制污染物(如细菌或真菌)生长的防腐剂。然而,它在抗体溶液中的存在会影响细胞培养过程中抗原抗体的使用,因为它有细胞毒性。它还会干扰抗体和偶联物的偶联,以及抑制辣根过氧化物酶的活性。
下面的三个步骤可以用来除去NaN3。
1.透析
一个透析装置可以用来将0.1毫升到70毫升的样品中的NaN3去除。这是一种半透膜,可以选择较宽范围的不同大小尺寸和孔径大小。使用一个孔径大小可以截留10-30kDa大小以上物质的膜将允许叠氮化物通过膜,但在溶液中将保留抗体和其他蛋白。2.脱盐
该步骤适用于体积较小的1-3毫升,脱盐柱有尺寸排阻性,由具有一定孔隙大小的小颗粒组成。
尺寸排阻是一种根据分子量来分离溶液中分子的方法。不同分子量的粒子将以不同速率通过尺寸排阻基质洗脱下来。例如,大分子不能进入基质的孔隙,因此首先被洗脱下来,而较小的分子则会渗入珠子而最后才被洗脱下来。
Sephadex G25色谱柱系统或等效的装置能有效地从抗体样品中去除NaN3。预包装的Sephadex离心柱是现成的,可用于此过程。
3.抗体纯化试剂盒
商业化的抗体纯化试剂盒也可被用于除去NaN3。抗体修复方法:
方法1:沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温;方法2:微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。
抗原修复方法:
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片需要抗原修复。
福尔马林固定的组织有可能破坏了原来组织的抗原结构,蛋白多肽发生交联,导致部分抗原表位封闭,结合位点减少,所以需要抗原修复,以暴露原来的抗原表位,达到充分显露抗原,以不出现明显脱片现象为佳。
抗原修复的几种常用方法(供参考)
1、 微波炉加热:
在微波炉里加热0.01枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)至沸腾后将组织芯片放入,断电,间隔5-10分钟,反复1-2次。根据玻片情况可参考采用微波加热“3-5-3法”3分钟温火沸腾后静止5分钟,再温火沸腾3分钟即可。
适用的抗原:来源于人、大鼠、小鼠的组织标本;来源于其他动物种属的组织标本。
2、 沸热修复:
电炉或水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲液(pH6.0)至95℃左右,放入组织芯片加热10-15分钟。
3、 高压热修复:
在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01m枸橼酸钠缓冲溶液(pH6.0).盖上不锈钢锅盖,但不能锁定。将玻片置于金属染色架上,缓慢加压,使玻片在缓冲液中浸泡五分钟,然后将盖子锁定,小阀门将会升起来。10分钟后除去热源,置入凉水中,当小阀门沉下去后打开盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。(骨及软骨组织的标本最好选择较温和的微波加热修复) 。
4、 酶消化方法:
常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热37℃,消化时间约为5-30分钟。
适用于被固定遮蔽的抗原:包括 Collagen.GFAP. Complement.Cytokeratin.c-erB-2.LCA.LN.等。
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