血小板膜蛋白提取试剂盒

库存 ：201

英文名 ：Platelet membrane protein extraction kit

保质期 ：一年

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：蛋白提取液2-8℃保存；溶解液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃

规格 ：50T/100T

特别提示：包括血小板膜蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：血小板膜蛋白提取试剂盒
英文名称：Platelet membrane protein extraction kit
产品货号：HR8023
产品规格：50T/100T

血小板膜蛋白提取试剂盒适用于从各种动物血小板中提取膜蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；溶解液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
【注】：
●蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
1．使用方便，蛋白提取的时间约1小时。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● 移液器●冰箱●冰盒
试剂：● Tyrode"s solution/CGS缓冲液/生理盐水/ PBS等
耗材：●离心管
● 吸头

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

1．提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每500μl蛋白溶解液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2.取1-5ml ACD抗凝血，室温200g离心10分钟。
【注】：
●离心力在180-220g 均可，不要大于250g。
● 最好用尽可能新鲜的血样。
3.收集上层血浆，弃下层血液细胞沉淀。
【注】：
● 如果血浆层与红细胞层之间形成白膜，小心吸取白膜层加入上层血浆。
4.上层血浆室温3000g离心15分钟，弃上清，收集沉淀。
【注】：
● 如果对血小板低活化程度要求较高，血小板需要进行再培养等处理，此步骤离心力可以降低到2000g，离心时间缩短至5分钟。
● 降低离心力和缩短离心时间会降低蛋白回收率。
5.沉淀中加入500μl提取液B 洗涤一次，3000g离心15分钟，弃上清，收集沉淀。
6．沉淀中加入300-500μl冷的蛋白提取液A，充分混匀后，在4℃条件下振荡30-50分钟。
【注】：
● 必须在2-8℃条件下振荡。
●用振荡器/摇床的较低转速，保持液体有轻微晃动即可。
● 没有振荡条件可以不振荡，2-8℃静置，稍微延长处理时间即可，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
7.在4℃，12000g条件下离心10分钟，取上清。
8.在37℃水浴10分钟。
9.在37℃,1000g离心3分钟。
【注】：
● 此步骤必须37℃条件下离心。
● 如果离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液澄清，分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。
10.此时液体分为2 层，小心移除上层溶液，留管底部的下层，大约30-50μl液体。
【注】：
● 下层为粘稠状液体。
11.用1-2倍体积的膜蛋白溶解液C溶解该液体，即得血小板膜蛋白样品。
12.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
血小板膜蛋白丰度较低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大血小板的上样量。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

除了血小板膜蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN100830	低pH缓冲液套装	30次
BTN70704A	预染蛋白Marker(14.4～97.4kD)	10次
BTN131118	*烯乙二醇	200mL
YT054	非变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X)	2ml
YT612	RIPA裂解液(强中弱套装)	共150ml
WE0274	蛋白标准溶液BSA	5ml
WE0287	SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)	500ml
WE0304	蛋白印迹膜再生液	100ml|500ml
SNM379	Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒	50块胶
SNM485	复合消化液	10ml
RFT151	高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)	20次(100μl)
KFS014	甘油明胶封片液	10ml
KFS055	DyLight405标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒	300T
SY0326	细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒	50T
JN0176	Protein A琼脂糖凝胶柱	1ml
QN1110	4×蛋白上样缓冲液(含β-巯基乙醇)	10ml
QN1277	非变性蛋白预制胶(10%)	10块
HR8010	核膜蛋白和核内蛋白提取试剂盒	50T/100T
HR0115	大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒	50T/100T
HR0183	细菌膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)	50T/100T
HR8065	酵母膜蛋白/细胞质蛋白提取试剂盒	50T/100T
HR8084	藻类膜蛋白提取试剂盒(2D电泳)	50T/100T
HR0309	蛋白酶抑制剂混合物片剂(EDTA Free)	1片/10片/20片
HR8125	Tris缓冲盐溶液(10×TBS,pH8.0)	500ml
GL2934	CLP蛋白酶抑制剂混合液(1mg/ml)	1ml