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库存 :466
英文名 :BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix
保质期 :一周
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :50次|100次
特别提示:包括第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂)(去除基因组DNA)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂)(去除基因组DNA)
英文名称:BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix
产品货号:JN0005
产品规格:50次|100次
本试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂(BalbScript Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs),浓度为2×。反应时只需要加入RNA模板和水即可,操作简单,降低操作过程中的污染。本制品含有去除基因组的成分gDNA Purge,可以同步去除基因组DNA污染。反应结束后,85℃加热5秒钟,就可以失活反转录酶、RNA酶抑制剂以及gDNA Purge。合成的第一链cDNA能直接用于PCR或荧光定量PCR的模板以及第二链cDNA的合成或线性RNA扩增的模板,也可用于带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。
试剂盒组成:
组份 | JN0005-50次 |
2×BalbScriptR PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix | 500μl |
gDNA Purge | 50μl |
RNase Free Water | 1ml |
注意事项:
1、用DEPC处理实验用到的所有器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,整个实验过程需戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂中无RNA酶污染。
3、试剂盒如不使用,要严格密封保存。在反转录过程中,所有管盖要确保扣严。
4、纯化过的RNA要保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯*,因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀法去除痕量污染物。
实验步骤:
第一链cDNA合成:
1、融化后,将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
2、按顺序加入下面的反应物
模板RNA | 总RNA(0.1 ng -5μg) poly(A) mRNA(10 pg) 特异性RNA(0.01 pg) |
2×BalbScript PreMix UltraMix | 10μl |
gDNA Purge | 1μl |
RNase Free Water | 至20μl |
3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构,可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后,65℃孵育5分钟,冰上冷却后再加入其它组分。
4、轻柔混匀后离心,于42℃条件下孵育60分钟。 如果RNA模板中不含poly A结构,可先在25℃条件下孵育5分钟,随后转到42℃条件下孵育60分钟。
5、70℃加热5min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应,如果不立即使用,在-20℃可保存一周左右。如想延长保存时间,建议使用-70℃保存。
第一链cDNA的PCR扩增:
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中,第一链cDNA反应液加入2μl。
储存条件:-20℃
除了第一链cDNA合成试剂盒(预混试剂)(去除基因组DNA),,我公司还供应以下相关产品:
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