即用型PMSF溶液(100mM)

库存 ：200

英文名 ：Phenylmethanesulfonyl fluoride

保质期 ：6个月

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：-20℃

规格 ：10ml

特别提示：包括即用型PMSF溶液(100mM)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：即用型PMSF溶液(100mM)
英文名称：Phenylmethanesulfonyl fluoride
产品货号：RFT193
产品规格：10ml

PMSF是一种不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶等，作用原理是特异性识别并磺化决定酶活性的丝氨酸残基活性位点。此外，其对半胱氨酸蛋白酶(如木瓜蛋白酶)和哺乳动物来源的乙酰胆碱酯酶也有抑制效果。PMSF常在细胞或组织裂解之前加入到裂解液中以预防蛋白的降解。PMSF可以单独使用，也常与其他蛋白酶抑制剂如胃抑肽酶A或者磷酸酶抑制剂如正钒酸钠混合使用。

本产品配备有PMSF溶解液，可以方便配制成100mMPMSF储备液。由于PMSF不溶于水，有毒性，不稳定的缺点，另有PMSF的无毒替代物，AEBSF(货号：AE1020)，活性和功能与PMSF相同，具有毒性低，稳定，溶于水的优点。在蛋白提取中，PMSF推荐使用终浓度为0.1-1 mM，由于PMSF在水系缓冲液中极其不稳定，必须现用现加。

配制使用方法：
取一管PMSF晶体全部加入到PMSF溶解液中，彻底溶解后即配成100mMPMSF溶液。在蛋白提取缓冲液中稀释100倍使用，如500μl提取缓冲液中加入5μl。
注：PMSF溶液在水系缓冲液中极其不稳定，必须现用现加。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

除了即用型PMSF溶液(100mM),，我公司还供应以下相关产品：



名称：RIPA裂解液(中)
货号：WE0257
规格：100ml
  RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产品。经RIPA裂解液(中)提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。
  RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。


注意事项：
1、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购，如:WE0276 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
3、建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如:WE0259 蛋白酶抑制剂混合物，WE0256 磷酸酶抑制剂混合物。
4、若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
5、对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。
6、对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500μl RIPA裂解液，以此类推。

使用方法：

一、细胞样品
贴壁细胞蛋白抽提
1、小心倾去贴壁细胞的培养液。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的PBS漂洗细胞。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Medium)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，试剂使用量请参考附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。

表1 贴壁细胞RIPA 裂解液使用量推荐表

细胞培养板类型或培养面积	RIPA 裂解液使用量
100 mm	500-1000μl
60 mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl /孔
24孔培养板	100-200μl /孔
96孔培养板	50-100μl /孔

4、将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

悬浮细胞蛋白提取
1、悬浮细胞，2,500×g离心5分钟，弃去上清。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟，弃去上清。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Medium)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，每5×106细胞加入约200-500μl RIPA Lysis Buffer(Medium)，吹打均匀。
4、冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

二、组织样品
1、取适当的RIPA Lysis Buffer(Medium)，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2、称量实验组织的重量，按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Medium)后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3、冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
4、14000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。

表2 蛋白裂解液性能、参数比较
 

目录号	WE0258	WE0257
名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)	SDS裂解液
裂解强度	强	中	温和	强
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1%脱氧胆酸钠, 0.1% SDS	1% NP-40， 0.5%脱氧胆酸钠 , 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25%脱氧胆酸钠	1%SDS
膜蛋白提取	很好	较好	一般	很好
胞浆蛋白提取	很好	很好	很好	很好
核蛋白提取	很好	较好	较好	很好
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，CO-IP	WB，CHIP

储存条件：2～8℃