产品详情
文献和实验
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英文名 :OS-RC-2
库存 :100
细胞类型 :科研
品系 :详情请咨询我司客服
组织来源 :详情请咨询我司客服
物种来源 :鼠/人/其它
细胞形态 :上皮样/成纤维样/其它
器官来源 :详情请咨询我司客服
运输方式 :常温运输/干冰运输
年限 :详情请咨询我司客服
生长状态 :贴壁/悬浮
产品介绍:人肾癌细胞_OS-RC-2培养物污染往往是细胞培养实验室最常遇到的问题,有时会带来十分严重的后果。污染物主要分为两类,一类是化学污染物,另一类是生物污染物。尽管无法彻底消除污染,但是可以通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术,降低污染发生的频率和严重程度。
传授细胞培养基本方法
细胞复苏步骤
一、所需仪器:
1)离心机
2)生物安全柜
3)电动移液器
4)CO2培养箱
5)倒置显微镜
6)液氮罐
7)恒温水浴锅
二、所需试剂:
1)胎牛血清(FBS)
2)无菌1×PBS pH=7.2
3)完全培养基
三、所需耗材:
1)离心管(15ml、50ml)
2)T-25细胞培养瓶
3)一次性无菌移液管(2ml、5ml、10ml)
四、操作步骤:
1.将恒温水浴锅中的水预热到37℃;
2.从液氮罐中取出要复苏的细胞,尽快转入恒温水浴锅中复温,工程中需要不断震荡冻存管以提高复温速率;
3.将融化了的冻存管中的用移液管转入一直装有5ml完全培养基的15ml离心管中,充分混匀后,300g离心5min;
离心完成后弃去上清,用1ml完全培养基重悬细胞后,转入T-25细胞培养中,再加完全培养基4ml,之后转入CO2培养箱中培养静置。
细胞冻存步骤
一、所需仪器:
1)-86℃超低温冰箱
2)离心机
3)生物安全柜
4)电动移液器
5)CO2培养箱
6)倒置显微镜
7)液氮罐
二、所需试剂:
2)离心机
3)生物安全柜
4)电动移液器
5)CO2培养箱
6)倒置显微镜
7)液氮罐
二、所需试剂:
1)胎牛血清(FBS)
2)细胞培养级DMSO
3)冻存液:80%FBS+20%DMSO
4)无菌1×PBS pH=7.2
5)消化液:0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA isopropanol
三、所需耗材:
1)离心管(15ml、50ml)
2)T-25细胞培养瓶
3)一次性无菌移液管(2ml、5ml、10ml)
4)1.8ml冻存管
5)程序降温盒
四、操作步骤:
- 将需要那冻存的细胞从CO2培养箱中取出,在生物安全柜内,打开培养瓶瓶口,吸弃瓶内的培养基;
- 向培养内加入无菌1×PBS 3ml,之后水平放置培养瓶,旋转震荡培养瓶,使PBS能够浸润到培养平面上所都的面积,吸弃PBS;
- 重复步骤2一次,之后向瓶内加入消化液1ml,轻微震荡后放入37℃CO2培养箱中孵育2-4min;
- 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起,如还有部分细胞为消化下来,可在生物安全柜内用移液管吸起消化液,吹打培养平面;
- 向消化下细胞的培养瓶中加入1ml含血清的完全培养基终止消化,然后将培养瓶中的液体转入15ml离心管中,300g离心5min;
- 离心完成后,弃上清,用0.5mlFBS重悬细胞,再加入0.5ml冻存液,用移液管充分混匀,之后转入1.8ml冻存管中;
- 将冻存管转入填充满isopropanol的程序降温盒中,之后转入-80℃冰箱中过夜降温;
- 第二天,取出降温完成的序降温盒中的冻存管,尽快转入液氮罐中保存。
产品图片:
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