miRNA cDNA第一链合成试剂盒

库存 ：479

英文名 ：miRNA cDNA Synthesis Kit

保质期 ：长期

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：-20℃

规格 ：25次

特别提示：包括miRNA cDNA第一链合成试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：miRNA cDNA第一链合成试剂盒
英文名称：miRNA cDNA Synthesis Kit
产品货号：WE0157
产品规格：25次

  本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A尾的方法来使miRNA具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应，最终合成miRNA对应的第一链cDNA。

  miRNA cDNA第一链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)尾修饰过程及修饰后逆转录过程需要的全部试剂。该试剂盒具有非常高的Poly(A)修饰和逆转录效率，可以从1ng-2μg的total RNA中有效获得miRNA对应的cDNA第一链。并且操作简便、快捷，可以用于从一个反应合成的cDNA中同时检测多种miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。

试剂盒组成：

组份	25次
Tris-Hcl，1 mM，PH 8.0	1ml
E.coli Poly(A)Polymerase，5U/μl	15μl
10×Poly(A)Polymerase Buffer	80μl
ATP，10 mM	15μl
RT Primer，25μM	90μl
5×UltraRT Buffer	120μl
UltraPure dNTP Mix，10 mM each	30μl
UltraRT	15μl
RNase-Free Water	1ml

备注：本试剂盒须与miRNA荧光定量检测试剂盒(WE0158)配套使用。

自备实验材料：1ng-2μg的总 RNA，或0.1ng-1μg的小分子RNA。

注意事项：
预防RNase污染，应注意以下几方面：
1、使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2、玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3、配制溶液应使用无RNase的水。
4、操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

使用方法：

A．miRNA加Poly(A)尾的过程：
1、首先根据所用RNA的量，按如下公式，用1 mM Tris(PH8.0)来稀释10 mM ATP：
ATP稀释系数=5000/__ng的总RNA
例：如果总RNA的起始用量为100ng，那么ATP稀释系数=5000/100=50。即将ATP稀释50倍(1μl的10 mM ATP加49μl的1 mM Tris，PH8.0)。
2、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入以下试剂至总体积25μl。
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
total RNA	Xμl	可达2μg
10×Poly(A)Polymerase Buffer	2.5μl	1×
第“1”步中稀释好的ATP	1μl	—
E.coli Poly(A)Polymerase, 5U/μl	0.5μl	2.5 U
RNase-Free Water	up to 25μl	—

注意：反应中使用的total RNA必须含有小分子RNA。

此过程也可以直接使用小分子RNA(建议加入量为2-5μl。请根据目的miRNA的丰度来确定加入量)。

3、轻轻混匀上述反应液，短暂离心将液体收集于管底。37℃，孵育15分钟。此过程结束后，立刻进行第一链cDNA的合成，或于-20℃暂存。如需长期保存，建议存放于-80℃。

B．修饰后的miRNA cDNA第一链合成的过程：
1、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入下表中试剂，至终体积20μl：
 

试剂	20μl反应体系
上述Poly(A)反应液	4μl
UltraPure dNTP Mix，10 mM each	1μl
RT Primer，25 μ M	3μl
5×UltraRT Buffer	4μl
UltraRT	0.5μl
RNase-Free Water	7.5μl

2、轻轻混匀上述反应液，短暂离心将液体收集于管底。42℃，孵育50分钟。
3、85℃，孵育5分钟，终止反应。合成的cDNA反应液可以直接进行荧光定量检测实验，也可以于-20℃保存备用。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

除了miRNA cDNA第一链合成试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN130985	免DNA提取PCR试剂盒(细胞组织裂解物直接PCR试剂盒)	100次
BTN100814	Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)	5μg
BTN101114	通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒	50次
YT383	PCR Master Mix (含绿色电泳染料)	400次|2000次10000次
YT386	dCTP溶液(100mM)	250μl
WE0117	BalbMulti多重PCR Mix	1ml|5ml
WE0127	全血Taq DNA聚合酶	2500U
WE0144	实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)	1ml|5ml
RFT105	Oligo(dT)18 Primer	100μl
RFT106	随机六聚体引物	100μl
SY0033	热启动DNA聚合酶	250U
SY0289	耐热逆转录酶I	2000U
JN0027	快速Pfu DNA聚合酶	250U
JN0040	2×Fast Taq PCR MasterMix	1ml×5
QN0954	通用引物 ITS4	250μl(10uM)
QN0957	通用引物 1492R	250μl(10uM)|1ml
QN0973	2×Taq PCR MasterMix (不含染料)	1ml|5*1ml
MT0024	HL Taq DNA聚合酶(高保真,长片段)	250U|1000U
MT0027	phi29 DNA 聚合酶	500U|10000U
GL1303	明胶水溶液(2%,PCR级)	50ml
GL1305	三磷酸腺苷溶液(ATP,10mmol/L)	10ml