Actin肌动蛋白，肌动蛋白（actin）

英文名 ：Actin

供应商 ：上海研卉生物科技有限公司

保存条件 ：低温

规格 ：1 x 1 mg

Actin肌动蛋白，肌动蛋白（actin）

Cytoskeleton肌动蛋白

肌动蛋白（actin）是一种在物种间高度保守的蛋白质，大小约43kDa，对构成细胞骨架和维持细胞形态有重要作用。肌动蛋白有三种主要的同种型（α、β和γ），同种型间的氨基酸（aa）同源性大于90%，大多数同种型的异质性位于氨基末端30个残基。肌动蛋白的氨基末端位于F-actin的双螺旋外围，该位点也被认为与肌球蛋白相互作用。

不同的肌动蛋白同种型在体外和体内表现出非常不同的行为。最近的研究表明了γ-肌动蛋白的不同亚细胞定位和肌动蛋白相关蛋白的同种型特异性结合。这些研究提示我们，肌动蛋白系统的体外研究应使用与体内同种型最密切相关的肌动蛋白。

G-actin聚合形成F-actin

游离的球状肌动蛋白（G-actin）在生理条件下容易聚合形成丝状肌动蛋白（F-actin），并伴随着ATP的水解。F-actin是如图1所示的双螺旋丝结构。

图1. 肌动蛋白丝的双螺旋结构

肌动蛋白在体外可以从两端聚合，然而，聚合速率并不相等，这会导致肌动蛋白丝的固有极性。因此，将快速聚合端称为正端（见图1）或倒钩端已成为惯例，而缓慢增长端称为负端或尖端。

肌动蛋白的聚合倾向取决于肌动蛋白单体对丝端的亲和力。因此，存在一个肌动蛋白单体浓度，低于该浓度肌动蛋白将不会聚合，这个值被称为临界浓度（Critical Concentration , CC）。当单体浓度高于CC时，肌动蛋白会聚合，直到自由单体浓度等于CC。

当一个人在体外使用肌动蛋白时，肌动蛋白聚合的程度取决于所使用的条件。例如，在4°C时，肌肉肌动蛋白在2 mM Mg²⁺和50 mM KCl存在下的CC为0.03 mg/ml，但当这些离子不存在时，CC大于3.0 mg/ml。因此，通过改变离子类型和强度，可以改变形成的聚合物的量。

非肌肉肌动蛋白有自己的CC值。例如，在4°C条件下，当存在2 mM Mg²⁺和50 Mm KCl时，CC大约为0.15mg/ml。如果用Ca⁺替换Mg²⁺和KCl，CC将增加到接近10 mg/ml。如果温度增加到30°C，非肌肉肌动蛋白的CC可以降低到0.03mg/ml。

肌动蛋白聚合物的测定

聚合度的测定是评价化合物对肌动蛋白功能影响的一种快速有效的方法。选择方法取决于可用的设备和所需的灵敏度。四种最可靠的方法是：

• Fluorescence enhancementof pyrene conjugates——芘共轭物的荧光增强

• DNase inhibition assays——DNA酶抑制实验

• Viscosity measurements——粘度测定

• Spin-down assays——降速分析

到目前为止，最通用、最敏感、最容易使用的方法是方法1。它包括将你的对照品和测试品与少量的芘结合的肌动蛋白（cat# AP05）混合，然后进行聚合。芘-肌动蛋白单体结合成聚合物形式后，荧光会增强到20倍（见图2）。

肌动蛋白聚合分为三个阶段，成核期（lag phase）、生长期（growth phase）和稳定期（steady state phase）。如图2所示。聚合程度由稳定期的荧光水平来表示，可通过添加一种能将CC值降低到<0.01 mg/ml的花环苷（一种肌动蛋白稳定化合物）来测量一个上限。该测定的准确度大于95%，并且在测定过程中样品不会受到干扰。.

关于这一实验更多细节，请参阅芘-肌动蛋白（cat#AP05）和肌动蛋白聚合生化试剂盒（cat#BK003）。

荧光肌动蛋白可用于研究体内（例如通过微注射到爪蟾卵或培养细胞中）和体外（例如肌球蛋白迁移率测定）的分子动力学。使用适当的肌动蛋白来完成特定的研究是很重要的，例如，你需要使用非肌肉肌动蛋白注射成纤维细胞和神经细胞类型。Cytoskeleton提供一系列荧光肌动蛋白产品，如骨骼肌形式荧光肌动蛋白（cat#AR05）和非肌肉形式荧光肌动蛋白（cat#APHR），用于聚合研究的芘-肌动蛋白（cat#AP05）。

生物素肌动蛋白是一种具有多种用途的衍生物：

1. 它可与链霉亲和素或亲和素包裹的金颗粒结合作为细胞肌动蛋白动力学的探针；

2. 它可用于体外分析，以标记肌动蛋白或使用链霉亲和素珠从复杂混合物中选择性地纯化它。Cytoskeleton提供骨骼肌形式的生物素标记肌动蛋白（cat#AB07）。

肌动蛋白纯度要求

根据目前对肌动蛋白的要求，Cytoskeleton能提供目前zui优质的肌动蛋白，具有以下优点：

• 可选择纯度大于95%或大于99%（如图3所示）；

• 可选择标记或未标记的蛋白质 ；

• 可选择细胞质、心脏、骨骼和平滑肌等多种来源；

• 可大批量供应。

图3. 在SDS-PAGE凝胶上样100μg >99%纯（AKL99）和>95%纯（AKL95）兔骨骼肌肌动蛋白，并用考马斯蓝染色。在聚合试验中，长箭头表示肌动蛋白，短箭头表示α-actin污染物（115kDa）

Cytoskeleton提供的肌动蛋白有＞95%的活性，而且纯度大于99%的肌动蛋白基本不含污染物（如cat#AD99、#AKL99、#APHL99和#AS99）。在特殊情况下，高分辨率动力学研究可能需要超纯肌动蛋白，如果你需要这种材料，请联系我们。

肌动蛋白抗体

Cytoskeleton公司致力于为肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白提供高质量抗体。一系列产品中的所有抗体都经过了QC max™测试。已测试QC max™抗体用于Western blots, in situ 和immunoprecipitation。您可以确切地知道每一种抗体的用途，并确保购买到一种适合你的抗体。

图4. 小鼠Swiss 3T3细胞抗肌动蛋白抗体染色的免疫荧光图像。100×物镜

一抗：兔抗肌动蛋白抗体（cat#AAN01），二抗：山羊抗兔罗丹明结合抗体，DNA染色：DAPI。

产品列表

产品列表：

产品应用详情了解：

1. 1.Actin生化检测试剂盒：

2、固定/活细胞Actin染色试剂盒:

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