MSCgo™间充质干细胞成软骨诱导分化试剂

细胞类型 ：MSC

供应商 ：上海逍鹏生物科技有限公司

规格 ：100ml

产品描述
MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Medium间质干细胞成软骨诱导分化培养基，无血清，无异源成分，即用型，适用于不同来源的hMSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。

成软骨结果
hMSC成软骨分化，细胞会聚集形成3D球状，同时伴随细胞外基质有蛋白聚糖 (Aggrecan) 富集的情形。所以可用Alcian Blue（深蓝色的含铜染料）染色检验蛋白聚糖，作为成熟软骨形成的指标。不过染色的强度会因不同hMSC来源（类型、年龄、代数）而有差异。

试剂盒组成
MSCgo™间质干细胞成软骨诱导分化培养基

产品描述	储存	货号	规格
MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Basal Medium	2-8°C	05-220-1B	100ml
MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Supplement Mix	-20°C	05-221-1D	10ml

完全培养基配制

1. 室温下解冻Supplement Mix。
2. 以1：10将Supplement Mix稀释进Chondrogenic Basal Medium（如：10ml Supplement Mix+90ml Basal Medium）。
3. 完全培养基可在2-8°C储存一个月。

成软骨实验所需材料
维持培养基
MSC NutriStem® XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1
MSC Attachment solution XF : BI；05-752-1

• 注：若您有MSC血清或者其他培养试剂也可使用。

分化培养基
MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Medium：05-220-1B, 05-221-1D

染色试剂（可选）
可选- Alcian Blue 8 GX（Sigma; A-3157）。建议选择Vivacell品牌，间充质干细胞成软骨分化染色试剂盒，货号：C37B00150。

成软骨诱导分化操作
以维持培养基接种hMSC

1. 细胞以1x10⁵/（10µl培养基）接种进1孔U底的96孔盘（非TC-treated）置于37°C，5% CO₂细胞培养箱2小时后 (促进细胞聚集成团)，小心加入0.1ml培养基。

• 此处仅为针对成软骨诱导的细胞接种操作，MSC NutriStem^® XF Medium详细操作步骤请参考其说明书。
• 小微团的培养方式有助于球状细胞团形成

2.  放回37°C，5% CO₂细胞培养箱继续培养。

以成软骨分化培养基诱导分化

1. 培养24小时后，将维持培养基吸除，每孔（96孔盘）加入0.2ml分化培养基

• 球状细胞团会在24-48小时形成

1. 置于37°C，5% CO₂细胞培养箱中培养14-21天；期间每3-4天更换一次分化培养基。

注意：培养时间长，可以得到更多成熟的软骨细胞（Alcian Blue染色强度更大）。

Alcian Blue染色操作（可选）
制备1% Alcian Blue 染色工作液

• 将0.2g Alcian Blue 8 GX（Sigma；A-3157）溶解于20ml 0.1N HCl中。
• 用0.45 μm注射器（如：Minisart 16555）过滤。
• 溶液置于2-8°C储存一年。

Alcian Blue染色过程

• 吸除培养基，用DPBS洗一次（BI；02-023-1，0.2ml/well）注意：小心操作不要吸入球状体。
• 固定：吸除DPBS，每孔加入0.2ml的10% 福尔马林（4% 甲醛）。室温固定30-60分钟。
• 吸除福尔马林，每孔用0.2ml 蒸馏水洗涤2次。
• 吸除蒸馏水，每孔加入0.2ml的Alcian Blue染色工作液。室温避光过夜。
• 吸除染液，每孔用0.2ml 0.1N HCl洗涤2-3次。
• 吸除HCl，每孔加入0.2ml 蒸馏水。
• 观察成软骨染色效果，图像采集，及软骨形成评估。注意：含有蛋白聚糖的软骨会被染成蓝色，不含蛋白聚糖的球形细胞团则否。

半定量Alcian Blue染色（可选）

• 每孔用0.15ml 8M Guanidine HCH溶液（GuHCl，Sigma；G9284）洗脱染料。
• 2-8°C过夜。
• 600nm 测OD值（8M Guanidine HCH溶液作为空白对照）。