MSCgo™间充质干细胞成骨/快速成骨诱导分化试剂

细胞类型 ：MSC

供应商 ：上海逍鹏生物科技有限公司

规格 ：100ml

 

产品描述 MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium间质干细胞成骨诱导分化培养基，无血清，无异源，即用型完全培养基，诱导hMSC分化为成熟成骨细胞。适用于不同来源的hMSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。 MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium 10天以内快速诱导成骨，而MSCgo™ OsteogenicDifferentiation Medium需要14-21天。 成骨结果 hMSC分化成骨后会矿化形成钙结节且有钙分泌，所以可以利用茜素红S (Alizarin Red S) 染色检视分化的成骨细胞。不同的细胞来源 (类型、年龄、代数)所得到的分化效果会有差异 试剂盒组成 MSCgo™间质干细胞成骨诱导分化培养基 产品描述 储存 货号 规格 MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium 2-8°C 05-440-1B 100ml MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium 2-8°C 05-442-1B 100ml 成骨实验所需材料 维持培养基 MSC NutriStem® XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1 MSC Attachment solution XF : BI；05-752-1 注：若您有MSC血清或者其他培养试剂也可使用。 分化培养基 MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium：BI；05-440-1 MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium：BI；05-442-1 染色试剂（可选） Alizarin Red S (ARS), Sigma; A-5533，建议选择Vivacell品牌，间充质干细胞成骨分化染色试剂盒，货号：C37C00150。 成骨诱导分化操作 接种hMSC：用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接种6x104细胞 (3x104 cells/cm2)。 此处仅为针对成骨诱导的细胞接种操作，MSC NutriStem® XF Medium详细操作步骤请参考其说明书。 若使用血清或者其他试剂方式培养MSC，可以略过包被步骤。 置于37°C，5% CO2细胞培养箱中培养。 以成骨分化培养基诱导分化 培养24h后确认细胞融合度达到80-90%，将维持培养基吸除，每孔（24孔盘）加入0.5ml分化培养基。 注：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。 置于37°C，5% CO2培养箱中培养10-21天，每2-3天换液。 注：培养时间越长，会有越多矿化的细胞，ARS染色更明显。 成骨评价：使用2%的ARS染色液。 ARS 染色分析 （可选） 制备2% ARS染色液 注意：染色液需新鲜制备，或调节到pH 4.1-4.3 将2g ARS (Sigma；A-5533) 溶解到100ml 蒸馏水中。 用0.1N HCl 或 0.5% (v/v) NH3调节到pH 4.1-4.3。 混合均匀，用0.45 μmCA 注射器(如：Minisart16555)过滤。 溶液置于2-8°C储存一年。 使用前需再确认pH值，如有必要用0.1N HCl 或 0.5% (v/v) NH3调节到pH 4.1-4.3。 ARS 染色过程 吸除培养基，用DPBS（BI; 02-023-1）洗一次（1ml/well） 固定：吸除DPBS，每孔加入1ml 70% EtOH。 室温固定30-60分钟。 吸除EtOH，用蒸馏水洗涤3次（1ml/well）。 吸除蒸馏水，每孔加入1ml 2% ARS 染色工作液。 室温静置30-60分钟。 吸除染色液，用1ml 蒸馏水洗涤4次（1ml/well）。 注意：细胞分泌的钙会洗脱掉，钙化结节会被染色。 每孔加入1ml 蒸馏水避免细胞干燥。 观察成骨染色效果、图像采集及进行成骨评价。 注意：成骨细胞含钙会被ARS染成橘红色。 半定量ARS 染色 （可选） 每孔用0.5ml 10% (w/v in DDW) CPC（Cetyl Pyridinium Chloride） 洗涤ARS染料。 室温下静置1小时。 550nm 测OD值（10% CPC作为空白对照）。(150μl/well; 96w/p)

ARS 染色：