细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)

库存 ：289

英文名 ：RNAtiqu Bacteria RNA Extraction Kit

保质期 ：1个月

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

保存条件 ：室温

规格 ：50次

特别提示：包括细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)
英文名称：RNAtiqu Bacteria RNA Extraction Kit
产品货号：WE0199
产品规格：50次

  本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总RNA。30-40分钟内即可完成反应，提取的总RNA纯度极高，没有蛋白质和其他污染，适用于RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FL及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	100个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：Lysozyme(WE0214S)、β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

实验前准备及重要注意事项：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL 4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、如未特殊说明，所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心2分钟收集菌体(菌体量最大不超过1×109)，小心去除所有上清。
注意：上清如果有残留，会影响后续的消化过程。
2、用含有Lysozyme的100μl TE缓冲液彻底重悬菌体，室温孵育。具体配方和孵育时间如下：

	TE缓冲液中Lysozyme的终浓度	孵育时间
G-细菌	400μg/ml	3-5分钟
G+细菌	3 mg/ml	5-10分钟

3、加入350μl裂解液RL(使用前请检查是否加入β-巯基乙醇)，涡旋震荡混匀(此步骤可能出现不溶性沉淀)，将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱中，12000rpm离心2分钟。
4、向上步得到的滤液中加入250μl无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中，12000rpm离心1分钟，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱装入新的RNase-Free的收集管中，向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。

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