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文献和实验
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库存 :292
英文名 :Saliva DNA collection and storage tube
保质期 :长期
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
规格 :2ml×10套
特别提示:包括唾液DNA收集和保存管在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:唾液DNA收集和保存管
英文名称:Saliva DNA collection and storage tube
产品货号:ALH177
产品规格:2ml×10套
本试剂盒可提供无疼痛、非侵入性的方法,患者不用忍受抽血的疼痛和感染的风险就能获得高质量、高数量的样品,受测者排斥性低,婴儿和老人都能方便取得DNA样本。收集过程十分简单,受测者将唾液吐至保存液内混匀就完成收集过程。混匀后常温下可运输保存长达一年不会变质。能够节省运送、保存冷藏设备和电力费用。收集的唾液通过几个简单步骤便可提取DNA。抽取的DNA产量高达110μg/2 mL唾液。
传统的人类基因组DNA样品的采集往往需要抽血采集并提取全血基因组DNA获得。该方法有几个明显的缺点:需要一定的采血设备并需要具有医务知识的人员来完成;抽血的疼痛造成排斥拒绝采样;侵入性采集增加了感染的可能性;采集后血液样品必须低温运输保存。
产品特点:
1.非侵入性采检方式免除了抽血的疼痛和降低了污染风险,并增加了取检的便利性,可由受检者自行取样。
2.仅需2ml的唾液样本,即可取得约110μg的DNA(不同个体产量差异很大)。
3.采样后的检体可稳定地储存于室温环境一年以上。
本制品别名:唾液DNA收集保存管
除了唾液DNA收集和保存管,唾液DNA收集保存管,我公司还供应以下相关产品:
名称:一步离心式石蜡清除剂
货号:BTN70302
规格:100次
用石蜡包埋组织作为材料进行PCR的难题之一是如何有效去除石蜡,因为残留的石蜡不但会影响DNA提取,还会干扰PCR扩增。常规的脱蜡方法一般需要1-2小时的时间,需要多次离心,每次离心都会造成样品的丢失。本产品只需要一步离心,克服了常规方法的缺点。
产品特点:
1.快速简单,只需要离心一次,免去了反复换液和离心,减少了样品的丢失。
2. 脱蜡效果好,跟经典的二甲*/乙醇法相当。
3. 即开即用,客户自己不需要准备额外的试剂。
产品组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 100mL |
溶液B | 7.5ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
1. 将1mL溶液A加入到1.5mL塑料离心管中。
2. 放入一片不超过25μm的石蜡包埋组织切片。
3.以最大速度振荡10秒。
4. 加入75μL溶液B。
5. 振荡10秒混合。
6. 7000 g离心2分钟,小心吸弃上清。
7.真空抽干机抽干离心管中残留的液体。此步骤约需要一小时。
8. 得到的石蜡包埋组织切片即可用于DNA提取。
名称:细菌基因组DNA提取试剂盒
货号:WE0178
规格:50次
本试剂盒适用于从革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌中提取高纯度总DNA,也适用于真菌等样本。本试剂盒每次可处理106-108个细胞,获得多至20μg总DNA。纯化过程中不需苯*或氯*等有毒溶剂,无需乙醇沉淀,一小时内即可获得高纯度DNA。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,而其他污染物可流过膜,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 |
Buffer GTL | 15ml |
Buffer GL | 15ml |
Buffer GW1(浓缩液) | 13ml |
Buffer GW2(浓缩液) | 15ml |
Buffer GE | 15ml |
蛋白酶K | 25 mg |
蛋白酶K 储存液 | 1.25ml |
吸附柱DM及收集管 | 50套 |
产品特点:
1、适用于从革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌等样品中分离纯化基因组DNA。
2、无需使用有机溶剂,彻底去除污染物以及下游反应抑制物,快速提取高品质DNA。
自备试剂:无水乙醇;提取革兰氏阳性菌需自备Enzymatic Lysis Buffer。
Enzymatic Lysis Buffer配制方法:20 mM Tris,pH8.0;2 mM Na2-EDTA,pH8.0;1.2% Triton X-100。121℃灭菌处理20分钟,加入适量的Lysozyme(溶菌酶)其终浓度为20mg/ml。详细配制方法可登录百奥莱博网站,搜索WE0178S产品查询。
实验前准备及重要注意事项:
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、如果提取次生代谢产物大量积累或细胞壁厚的细菌培养物的基因组,建议在对数生长期早期收集样品。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀出现,请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml),RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0225S。
7、如果提取样品为革兰氏阳性菌,需客户自行配制Enzymatic Lysis Buffer处理菌体,其中需使用浓度为20 mg/ml的Lysozyme(溶菌酶),Lysozyme本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0214S。
操作步骤:
一、革兰氏阴性菌基因组DNA的提取:
1、取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞,最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中,12000rpm(~~13400×g)离心1分钟,尽量吸净上清。
2、向沉淀中加入180μl Buffer GTL,振荡使菌体重悬。
3、加入20μl 蛋白酶K ,涡旋混匀,56℃孵育,直至溶液变清亮,孵育过程中每隔一段时间颠倒或震荡离心管使样本分散。
注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号:WE0225S),震荡混匀,室温放置5-10分钟。
4、加入200μl Buffer GL,涡旋震荡充分混匀。加200μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
注意:
1)如果多个样品一起操作,Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入,震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
5、将步骤4所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤9;若洗脱体积小于200μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μlBuffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
二、革兰氏阳性菌基因组DNA的提取:
1、取细菌培养物1-5ml(106-108个细胞,最多不超过2×109个细胞)置于离心管(自备)中,12000rpm(~13400×g)离心1分钟,尽量吸净上清。
2、加入180μl Enzymatic Lysis Buffer(自备)使菌体重悬。Enzymatic Lysis Buffer配制方法见说明书前部分自备试剂。
3、37℃孵育30分钟。
4、加入20μl 蛋白酶K 涡旋震荡,充分混匀。加入200μl Buffer GL,涡旋震荡混匀。
注意:不要把蛋白酶K 直接加到Buffer GL中。
5、56℃孵育30分钟。
注意:
1)如果需要,95℃孵育15分钟可以使病原体失活,但是95℃孵育会造成一些DNA的降解。
2)如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号:WE0225S),震荡混匀,室温放置5-10分钟。
6、加入200μl无水乙醇,涡旋震荡充分混匀。
注意:加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
7、将步骤6所得溶液(包括形成的沉淀)全部加入到已装入收集管的吸附柱,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤9。
10、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新离心管(自备)中,向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤11;若洗脱体积小于200μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
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