ClonExpress II One Step Cloning Kit

库存 ：大量

英文名 ：ClonExpress II One Step Cloning Kit

供应商 ：上海信裕生物科技有限公司

规格 ：25 rxn/50 rxn

●   简单、快速、高效，适用于任何载体

●  不依赖于连接酶，无载体自连现象，阳性率可达95%以上

●  可高效克隆50 bp-10 kbp DNA片段

●  线性化克隆载体和PCR产物可不进行纯化直接克隆

●  无需考虑插入片段自身携带的酶切位点

 

 

 

克隆效率极高

图1. 重组产物转化后平板上一般可形成数千个单克隆，而无插入片段的阴性对照反应转化后只有数个单克隆形成。因此ClonExpress系统的自连背景会大大降低连接酶依赖的克隆方式。

 

 

克隆阳性率95%以上

图2. 鉴定酶切结果表明，克隆阳性率可达95%以上。

      ClonExpress^® II是新一代的重组克隆试剂盒，包含增强的重组酶Exnase^® II，可以显著提高重组克隆效率。首先将载体进行线性化，并在插入片段PCR引物5'-端引入线性化载体的末端序列，使得PCR产物5'和3'最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列（15bp～20bp）。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后，在Exnase^® II的催化下，反应30 min即可进行转化，完成定向克隆，阳性率可达95%以上。

 

引物设计原理

 

图3. 插入片段扩增引物设计方式示意

ClonExpress 系统的引物设计方式可概括为15bp载体序列+完整的酶切位点+基因特异序列。