HAKATA 无血清细胞冻存液
Cell Freezing Medium
货号：Cat No:H-W-50/100

产品介绍
HAKATA无血清细胞冻存液是HAKATA团队在长时间细胞培养研究中不断优化得出的通用型无血清细胞冻存液。HAKATA无血清细胞冻存液可降低细胞在冻存过程中冰晶的产生，提高细胞活力和复苏率。与传统冻存液相比，冻存程序简单，用冻存液重悬细胞后可直接置于-80℃冻存，且可在-80℃长期保存（>5 年）。本产品化学成分明确，不含异源蛋白保证冻存细胞的安全。本产品不仅适用于绝大部分动物细胞系，同样适用于间充质干细胞内皮细胞等原代细胞。本产品仅用于科研用途，不可用于其他用途。

产品特色

使用方便，无需额外添加成分。
无需程序性降温，减少冻存时花费的精力和成本。
安全性高，微生物污染概率小，对细胞正常生长分化无影响。
保护细胞，增强细胞活力，复苏率可达90%以上。
适用于包括干细胞在内的各类哺乳动物细胞冻存。

操作步骤

细胞冻存步骤

HAKATA细胞冻存液预冷至4℃，需要添加时再取出。
收集对数生长期的贴壁细胞或悬浮细胞于离心管中并计数。
根据所需冻存细胞数量确定所需细胞悬浮液数量。
将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000r/min，离心5 分钟，小心弃去上清液，收集培养细胞沉淀。
加入适量预冷的HAKATA 无血清细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为 5×10⁵-2×10⁶/ml。轻轻地吹打细胞，使细胞混匀。
将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管 0.5-1.5ml。
将细胞冻存管尽快置于-80℃超低温冰箱中，可较长期冷冻保存。
若需液氮中长期保存，需先在-80℃冰箱过夜，再移至液氮罐中保存。

冻存细胞复苏步骤

从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入 37℃水浴锅中快速解冻。
待冻存管中细胞混合液完全融化后，转移至离心管，使用移液管缓慢加入5ml新鲜培养基到细胞沉淀，轻轻吹打混匀。
1000r/min离心5min，小心弃去上清，再加入新鲜培养基，轻轻吹打混匀，转移至培养瓶或培养皿中。

保存条件
常温运输，经常使用可放在4℃保存，长期储存需放在-20℃，有效期 36 月。

无血清细胞冻存液（冻存步骤）

1、常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。

2、根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。

3、将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000rmp，5 分钟离心收集培养细胞沉淀，彻底弃去离心管中的上清液。

4、加入适量的HATAKA无血清细胞冻存液细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为 5×10⁵-1×10⁷/ml。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。

5、将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管 1ml 或 1.5ml。

6、直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中，可长期冷冻保存。

7、如果想液氮中长期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天时间，方可移至液氮罐中保存。

无血清细胞冻存液（复苏步骤）
1、从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入 37℃水浴槽中快速解冻。
2、待冻存管中细胞混合液完全融化后，立即加入 1ml 细胞培养基于冷冻管中与细胞混合，加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓加入到细胞沉淀，轻柔地混匀，将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。
3、镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。

实验对比图：

无血清细胞冻存液质量保障
HAKATA无血清细胞冻存液细胞冻存液经过严格的内毒素、渗透压、病原体和 pH 检验，确保产品不含病菌、病毒以及支原体等。用于常规的细胞冻存，-80℃可长期保存（>5 年），细胞存活率在90-98%。

注意事项
HAKATA无血清细胞冻存液在冻存细胞分装后，应减少在外存放时间，尽快移入到-80 ℃超低温冰箱。
对于干细胞（ES 细胞）等冻存时，我们建议用户在使用前，事先对所冻存的胞进行至少为期1周的该产品试验性细胞冷冻保存培养，确认性能后再进行正式冻存。
本品含有 10%DMSO，部分对 DMSO 敏感的细胞，建议对其进行至少1周的本产品试验性的细胞冻存培养，确认性能后再正式冻存。