AAV 在神经领域中的应用价格

提供商：吉凯基因

服务名称：AAV 在神经领域中的应用

AAV 在神经系统中的应用

AAV 在神经领域中的应用优势
1. 扩散性强：体积小，滴度高，具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性，可穿透血脑屏障，是最理想的神经元和胶质细胞感染工具。
2. 特异性强：有十数种常用的血清型，不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力。
3. 免疫原性低：局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时，很少有感染上的细胞之后被免疫系统所清除。这种特性对于动物实验显然极有帮助。

AAV 应用于神经系统的文献综述

病毒类型	注射部位	病毒滴度（量）	注射方法	检测时间	代表文献
AAV	小鼠单侧皮层	0.5-5×1013 v.g/mL	1.5 μL/ 位点，按照核团的坐标一侧皮层注射3个位点	28天	【1】
	小鼠双侧皮层	1.49×1012 v.g/mL	0.5 μL/ 位点，速度30nL/min，留针10 min	至少28 天	【2】
	小鼠双侧海马		1 μL/ 位点，速度0.2μL/min，留针10 min	14 天	【3】
	小鼠双侧松果体	1×1012 v.g/mL	0.8-1 μL / 位点，速度100-150μL/min, 保留5 min		【4】
	小鼠脊髓注射	1×1012 v.g/mL	8 个位点， 1 μL / 位点	30 天	【5】

AAV 在神经系统中的应用

1. 皮层注射

2. 海马体注射

3. 松果体注射

4. 脊髓注射

AAV 在神经系统中的注射方法综述
脑立体定位注射

第一部分：实验前准备
1. 首先麻醉小鼠。
2. 然后从饲养笼中取出小鼠。5-10min 后，麻醉剂起效。
3. 待小鼠麻醉后，用剃毛器将小鼠头部毛发剔除干净。

第二部分：固定小鼠
1. 将麻醉剔毛后的小鼠固定到立体定位仪上。
2. 固定时，先将小鼠门齿卡在适配器门齿夹上，轻轻压上门齿夹横杆，调整适配器高度和前后，使耳杆可以方便进入小鼠外耳道。
3. 左手托起小鼠头部，将左侧耳杆插入小鼠耳道，调节左右侧耳杆使动物头部保持在U 型开口的中心位置，先锁紧固定一侧耳杆，后旋紧另一侧耳杆，使动物头部不能晃动，同时旋紧门齿夹螺丝。
4. 检查是否固定成功：鼻对正中，头部不动，提尾不掉，目测大脑放置水平。
5. 用脱毛膏或者剃刀将需要手术部位的毛发去除。
6. 然后用手术刀划开小鼠头部皮肤，去除颅骨表面结缔组织，暴露前后囟。
7. 根据脑图谱，确定待注射脑区的位置参数，包含离Bregma 和Lambda点的距离以及核团深度。
8. 以Bregma 为0 点，按照预先确定好的坐标移动颅骨钻，打开合适大小的骨窗（窗口尽量小但是又不妨碍实验）。小心地用颅骨钻在注射位点处轻磨颅骨，将颅骨慢慢打薄，当颅骨出现裂缝的时候，用医用注射器的针头小心挑破，防止损伤，如果在此过程中有出血，可以用很小的医药棉球拉成长条形将血吸走，钻孔时一定要控制好，否则很容易在钻通颅骨后一不小心钻头进入脑组织，造成损伤。

第三部分: 注射病毒
1. 用PBS 冲洗微量注射器3-5 次。
2. 先吸取1μl 空气，再吸取1μl 稀释好的病毒( 方便病毒充分注射进脑)，在空气中测试注射器是否通畅；
3. 将微量注射泵，微量注射器组装好，置于钻好的孔上方，针尖与颅骨平行(Z=0)，微调注射器位置使之与之前钻孔时位置相同。
4. 根据定好的深度将注射针缓慢下降。