膜片钳技术服务

提供商 ：三联兄弟生物医药

服务名称 ：膜片钳技术

规格 ：数据

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    公司于2020年4月开始免费提供相应技术的课题申报、技术路线可行性分析、费用预算、实验设计、技术应用、数据分析、图表处理等信息咨询服务。

    膜片钳技术是用微管电极接触细胞膜，以亿欧姆以上的阻抗使之封接，使电极尖开口处相接的细胞膜小区域与其周围在电学上分隔，对此膜片上的离子通道电流进行检测记录。它是一种以记录透过离子通道的离子电流来反映细胞膜上通道的分子活动，从而使膜片钳技术在许多细胞的功能研究上得以应用。

    目前膜片钳技术广泛应用于分子生物学、免疫学、神经科、脑科、麻醉科、临床药理、心血管科学、药理学、细胞生物学、病理生理学、中医药学、植物细胞生物学、运动生理学等众多与细胞电生理相关的学科研究领域。应用简介如下：
(1)、膜片钳技术在通道研究中的重要作用 
　　膜片钳技术可以直接观察和分辨单离子通道电流及其开闭时程、区分离子通道的离子选择性、同时可发现新的离子通道及亚型，并能在记录单细胞电流和全细胞电流的基础上进一步计算出细胞膜上的通道数和开放概率，还可以用以研究某些胞内或胞外物质对离子通道开闭及通道电流的影响等，同时用于研究细胞信号的跨膜转导和细胞分泌机制。结合分子克隆和定点突变技术，膜片钳技术可用于离子通道分子结构与生物学功能关系的研究。 
　　膜片钳技术还可以用于药物在其靶受体上作用位点的分析。如神经元碱受体为配体门控性离子通道，膜片钳全细胞记录技术通过记录碱诱发电流，可直观地反映出神经元碱受体活动的全过程，包括受体与其激动剂和拮抗剂的亲和力，离子通道开放、关闭的动力学特征及受体的失敏等活动。使用膜片钳全细胞记录技术观察拮抗剂对碱受体激动剂量效曲线的影响，来确定其作用的动力学特征。然后根据分析拮抗剂对受体失敏的影响，拮抗剂的作用是否有电压依赖性、使用依赖性等特点，可从功能上区分拮抗剂在碱受体上的不同作用位点，即判断拮抗剂是作用在受体的激动剂识别位点，离子通道抑或是其它的变构位点上。 
(2)、与药物作用有关的心肌离子通道 
　　心肌细胞通过各种离子通道对膜电位和动作电位稳态的维持而保持正常的功能。近年来，国外学者在人类心肌细胞离子通道特性的研究中取得了许多进展，使得心肌药理学实验由动物细胞模型向人心肌细胞成为可能。 
(3)、对离子通道生理与病理情况下作用机制的研究 
　　通过对各种生理或病理情况下细胞膜某种离子通道特性的研究，了解该离子的生理意义及其在疾病过程中的作用机制。如对钙离子在脑缺血神经细胞损害中作用机制的研究表明，缺血性脑损害过程中，Ca2+ 介导现象起非常重要的作用，缺血缺氧使Ca2+通道开放，过多的Ca2+进入细胞内就出现Ca2+超载，导致神经元及细胞膜损害，膜转运功能障碍，严重的可使神经元坏死。
(4)、对单细胞形态与功能关系的研究 
　　将膜片钳技术与单细胞RT-PCR技术结合，在全细胞膜片钳记录下，将单细胞内容物或整个细胞（包括细胞膜）吸入电极中，将细胞内存在的各种mRNA全部快速逆转录成cDNA，再经常规PCR扩增及待检的特异mRNA的检测，借此可对形态相似而电活动不同的结果做出分子水平的解释或为单细胞RT-PCR提供标本，为同一结构中形态非常相似但功能不同的事实提供分子水平的解释。
(5)、对药物作用机制的研究 
　　在通道电流记录中，可分别于不同时间、不同部位（膜内或膜外）施加各种浓度的药物，研究它们对通道功能的可能影响，了解那些选择性作用于通道的药物影响人和动物生理功能的分子机理。这是目前膜片钳技术应用最广泛的领域，既有对西药药物机制的探讨，也广泛用在重要药理的研究上。
(6)、在心血管药理研究中的应用 
　　膜片钳技术在心血管方面的广泛应用，对血管疾病和药物作用的认识不仅得到了不断更新，而且在其病因学与药理学方面还形成了许多新的观点。 
(7)、创新药物研究与高通量筛选 
　　在离子通道高通量筛选中主要是进行样品量大、筛选速度占优势、信息量要求不太高的初级筛选。最近几年，分别形成了以膜片钳和荧光探针为基础的两大主流技术市场。将电生理研究信息量大、灵敏度高等特点与自动化、微量化技术相结合，产生了自动化膜片钳等一些新技术。 
（8）、在神经科学中的应用 
　　膜片钳技术与离体脑片技术结合，可以定位研究神经元离子通道，还可以进行神经元突触联系的研究，与使用培养的或急性分散的神经元相比具有不可替代的优势。
（9）、细胞分泌的研究
采用膜片钳技术通过对膜电容变化的细微测量，可以检测到单个分泌囊泡与细胞膜融合时引起膜电容增加的胞吐过程。另外还可以研究细胞对某些物质进行吞噬的胞吞过程。
（10）、在光学遗传学的研究
在某些神经元中表达对光敏感的通道蛋白，在光的刺激下，通过膜片钳技术可以看到被激活的神经元的活动，若是整体实验，还可以观察到动物整体行为的变化。