I-BET-762 BET抑制剂

荧光共振能量转移（FRET）滴定

在有四乙酰化的组蛋白H4肽（200 nM）存在的条件下，在50 mM HEPES pH7.5, 50 mM NaCl, 0.5 mM CHAPS中对BRD2 (200 nM), BRD3 (100 nM) 和 BRD4 (50 nM) 进行I-BET滴定。平衡1小时后，在含0.05% (v/v) BSA 和 400 mM KF的实验缓冲液中加入2nM 铕穴状化合物标记的链霉亲和素和10 nM XL-665标记的anti-6His 抗体，使用FRET检测溴区蛋白：肽相互作用。使用Envision酶标仪（激发菠长320 nm，发射波长615 nm和665 nm）对实验板进行读数。

细胞系

CD4+ T细胞

溶解方法

该化合物在DMSO中的溶解度> 10 mM。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。

反应时间

125、250和500 nmol/L 处理120 h;

应用

I-BET-762处理CD4+ T细胞，诱导细胞中细胞因子的差异化变化，表现为上调抗炎基因（IL-10、Lag3与Egr2）的表达而抑制炎症因子（GM-CSF与IL-17）的表达。

动物模型

C57BL/6小鼠模型

剂量

30 mg/kg、尾静脉注射给药、一天两次、持续2天；或500 nM

应用

I-BET-762 (30 mg/kg、尾静脉注射给药) 对内毒素休克和败血症的发生有显著的治疗效果，并且抑制体内炎症的发生；同时用I-BET-762处理自身反应性Th1T细胞，能干扰抑制自身反应性Th1T细胞诱导的体内病理学的改变。

注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。实际溶解度和理论值可能略有不同，这是由实验系统的误差引起的，属于正常现象。

References:

1. Nicodeme, E., Jeffrey, K. L., Schaefer, U., Beinke, S., Dewell, S., Chung, C. W., Chandwani, R., Marazzi, I., Wilson, P., Coste, H., White, J., Kirilovsky, J., Rice, C. M., Lora, J. M., Prinjha, R. K., Lee, K. and Tarakhovsky, A. (2010) Suppression of inflammation by a synthetic histone mimic. Nature. 468, 1119-1123

2. Bandukwala, H. S., Gagnon, J., Togher, S., Greenbaum, J. A., Lamperti, E. D., Parr, N. J., Molesworth, A. M., Smithers, N., Lee, K., Witherington, J., Tough, D. F., Prinjha, R. K., Peters, B. and Rao, A. (2012) Selective inhibition of CD4+ T-cell cytokine production and autoimmunity by BET protein and c-Myc inhibitors. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 14532-14537