研选腺相关病毒AAV包装/载体构建一站式服务

腺相关病毒AAV包装/载体构建一站式服务

 AAV 

腺相关病毒( adeno-associated virus，AAV) 是一类细小病毒，基因组为单链DNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。通常需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。重组腺相关病毒（recombinant AAV, rAAV）是利用AAV2 型基因组与不同血清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体病毒载体，可将目的基因的CDS 区序列或者RNAi 干扰序列插入rAAV 表达质粒中，包装病毒后感染细胞完成对目的基因的操作。在人类和小鼠中，AAV 感染可以介导外源基因发生低频率（不高于2%）的定向整合，插入的位置一般在19 号染色体短臂（人类基因组中的AAV S1 和鼠中的ROSA26 位点）。病毒基因组在不发生整合的情况下在被感染细胞内形成伴随体。腺相关病毒广泛应用在神经领域、心血管领域、肝脏、肌肉、肺、及其他领域，其主要的应用方向在于定位注射和整体注射。

优势

AAV相比于其他病毒载体的优势：

a. 表达时间长： 绝大多数重组rAAV 不会整合到基因组上，而是在宿主细胞中串联形成附加体（episome）存在于细胞核中 ，细胞在细胞复制和分裂后会丢失附加体，并因此失去基因表达能力，rAAV在细胞分裂不旺盛的组织中可持续表达6个月以上;
b. 扩散性强： rAAV 的体积小，滴度高，因此具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性，可以穿透血脑屏障，是理想的神经元和胶质细胞感染工具;
c. 特异性强： rAAV 有十数种常用的血清型，不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力，是动物实验首;
d. 安全性高： 目前还没有发现AAV 对人体致病，是美国FDA 批准的可以直接用于人体基因治疗的最安全的病毒载体;
e. 免疫原性低： 当AAV 用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时，不易造成免疫反应;
f.  高稳定性： rAAV 病毒在4℃可以保存1 周，并且对氯仿等试剂具有抗性。

 

包装服务

AAV包装流程

 

血清型选择

根据衣壳蛋白的差异，目前AAV可分为12种血清型(AAV-1~AAV-12)和100多种变异体。不同的AAV 具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性，因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别，这也导致不同血清型转染的细胞类型和感染效率也各不相同，那么如何选择合适的血清型呢，首先我们需要了解下AAV 不同血清型的组织趋向性。

吉凯为您总结不同部位适合的血清型，供您参考。


 

吉凯小建议：
1. 如您不确定选择哪种血清型，可尝试使用感染谱最广的9型。
2. 如初次使用AAV，可使用AAV彩虹装进行预实验，通过彩虹装比较不同血清型对目标组织的感染效果，摸索最佳的注射方法、注射位点、病毒用量等，以便得到更理想的实验结果。

 

AAV彩虹装
AAV彩虹装是吉凯基因通过查询相关文献，将适合不同组织的常用血清型组合而成的套装产品。



*各血清型在神经系统研究中作用：1型，可作为顺行示踪跨单突触标记的血清型使用 ；9型，可作为顺行示踪非跨突触标记的血清型使用；Retro，可作为逆向示踪非跨突触标记的血清型使用； PH.eB，适合中枢神经系统，可穿过血脑屏障、胎盘屏障，常通过尾静脉注射使用 。

吉凯腺相关病毒系列产品

1.  现货AAV产品
光遗传、化学遗传、钙指示剂是神经研究常用的技术。登录吉凯商城查询与购买：光遗传、化学遗传、钙指示剂等现货AAV产品，此外，还有荧光示踪、重组酶、AAV彩虹装等现货AAV产品，共108种类，满足您不同的实验需求。

现货AAV产品涵盖2/5/8/9 四种血清型。最快5 个工作日发货。

 

2.  组织特异性启动子AAV

吉凯提供20余种组织特异性启动子AAV载体（下图），可快速实现动物水平组织特异性调控，更高效更精准地表达外源基因。

AAV常用载体信息

调控方式	载体编号	元件顺序	载体容量(bp)	荧光	荧光是否融合表达
过表达	GV388	CMV bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG-WPRE-hGH polyA	1207	EGFP	融合
	GV389	CMV bGlobin-MCS-mCherry-3FLAG-WPRE-hGH polyA	1207	mCherry	融合
	GV410	CMV bGlobin-MCS-3FLAG-T2A-EGFP	1130	EGFP	非融合
	GV411	CMV-betaGlobin-MCS-3Flag-SV40 PolyA	2819	无	无荧光
	GV461	CMV-betaGlobin-MCS-SV40 PolyA	2890	无	无荧光
	GV467	CMV-betaGlobin-MCS-EGFP-3Flag-SV40 PolyA	2095	EGFP	融合
	GV489	CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA	1285	EGFP	融合
	GV466	hSyn promoter-MCS-EGFP-3FLAG-SV40 PolyA	2186	EGFP	融合
	GV475	hSyn promoter-MCS-mcherry-3FLAG-SV40 PolyA	2186	mCherry	融合
	GV488	gfaABC1D promoter-MCS-EGFP-WPRE-bGH PolyA	1591	EGFP	融合
干扰	GV478	U6-MCS-CAG-EGFP		EGFP	非融合
	GV480	U6-MCS-CAG-mCherry		mCherry	非融合
miRNA-up	GV412	CMV bGlobin-EGFP-MCS-WPRE-hGH polyA		EGFP	非融合
	GV413	CMV bGlobin-mCherry-MCS-WPRE-hGH polyA		mCherry	非融合
miRNA-down	GV479	U6-MCS-CAG-EGFP		EGFP	非融合
	GV480	U6-MCS-CAG-mCherry		mCherry	非融合

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引用文献

1. Gephyrin Palmitoylation in Basolateral Amygdala Mediates the Anxiolytic Action of Benzodiazepin. Biological Psychiatry (IF=11.982). 吉凯产品：过表达AAV 研究领域：焦虑症  华中科技大学同济医学院
2. Gene deficiency and pharmacological inhibition of caspase-1 confers resilience to chronic social defeat stress via regulating the stability of surface AMPARs. Molecular Psychiatry (IF=11.64). 吉凯产品：过表达AAV  血清型：AAV1 研究领域：抑郁症  华中科技大学同济医学院
3. Hippocampal PPARα is a novel therapeutic target for depression and mediates the antidepressant actions of fluoxetine in mice. British journal of pharmacology (IF=6.81). 吉凯产品：干扰AAV 研究领域：抑郁症  南通大学药学院
4. Overexpression of LH3 reduces the incidence of hypertensive intracerebral hemorrhage in mice. JOURNAL OF CEREBRAL BLOOD FLOW AND METABOLISM  (IF=6.045). 吉凯产品：干扰AAV 血清型：AAV9 研究领域：高血压性脑出血  中国医学科学院阜外医院
5. Long non-coding RNA H19 contributes to apoptosis of hippocampal neurons by inhibiting let-7b in a rat model of temporal lobe epilepsy. Cell Death and Disease (IF=5.638). 吉凯产品：干扰和过表达AAV 血清型：AAV9 研究领域：颞叶癫痫  首都医科大学
6. Mesenchymal Stem Cells with Enhanced Bcl-2 Expression Promote Liver Recovery in a Rat Model of Hepatic Cirrhosis. Cellular Physiology and Biochemistry (IF=5.5). 吉凯产品：过表达AAV 研究领域：肝硬化  哈尔滨医科大学附属第二医院
7. LncRNA H19 contributes to hippocampal glial cell activation via JAK/STAT signaling in a rat model of temporal lobe epilepsy. Journal of Neuroinflammation  (IF=5.193). 吉凯产品：干扰和过表达AAV 血清型：AAV9 研究领域：颞叶癫痫  首都医科大学