Pfu DNA Polymerase

英文名 ：Pfu DNA Polymerase

库存 ：Pfu DNA Polymerase

供应商 ：上海研卉生物

规格 ：250U×5

Pfu DNA Polymerase

目录号：E002-02B

产品描述:

本制品为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA聚合酶基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3´→5´外切酶(校正)活性，当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶，其错误率仅为1.3×10-6，推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

产品用途：

用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成，DNA片段的补平等。

使用建议：

Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3´端"A"突出，其PCR产物的克隆有几种方案。

1）PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中。

2）将产物3´末端加A后再与T载体连接。

3）引物中引入15bp与载体同源序列，利NovoRec^® PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat No:NR005）直接连接到目的载体。

由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入Pfu DNA聚合酶。

保存温度：-20℃

注意事项：

1）2mM Mg²⁺可以满足绝大多数PCR扩增，对于某些PCR，为了保证较好的扩增，可调节为2-4mM。

2）体系中加入推荐的酶量，可以满足大多数PCR扩增，对于某些PCR，为了得到较好的扩增，可适当增加酶量。

应用实例：

图例）50μl扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对500bp~6.0kb片段的扩增结果。

泳道1：0.5kb；泳道2：1.0kb；

泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb；

泳道5：4.0kb；泳道6：6.0kb；

泳道M：1kb DNA Ladder Plus II。

参考文献：

E2 ubiquitin-conjugating enzyme UBE2L6 promotes Senecavirus A proliferation by stabilizing the viral RNA polymerase[J]. Liang Li. et al. PLOS PATHOGENS. 2020.

For research use only.

相关产品：
E006-02B 2×Pfu Master Mix（Quick Load）

E006-01B 2×Pfu Master Mix 1ml×5
E002-01B Pfu DNA Polymerase(with dNTP) 250U×5
E035-02B 2×Fast Pfu Master Mix（Quick Load） 1ml×5

E035-01B 2×Fast Pfu Master Mix 1ml×5
E031-02B Fast Pfu DNA Polymerase 250U×5
E031-01B Fast Pfu DNA Polymerase(with dNTP) 250U×5