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库存 :330
英文名 :miRNA qPCR Assay Kit
保质期 :长期
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
保存条件 :-20℃
特别提示:包括miRNA荧光定量检测试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:miRNA荧光定量检测试剂盒
英文名称:miRNA qPCR Assay Kit
产品规格:125次
本试剂盒采用SYBR Green I嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。试剂盒包括检测所需的2×miRNA qPCR premix和Reverse primer。
2×miRNA qPCR premix是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂,所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合,使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的BaldStar Taq DNA polymerase是经化学修饰的高效热启动酶,配合独特的缓冲体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。
试剂盒组成:
组份 | 125次 |
2×miRNA qPCR Mixture(ROX) | 2×750μl |
Reverse Primer,10μM | 60μl |
ddH2O | 1.5ml |
备注:本试剂盒须与miRNA cDNA第一链合成试剂盒(WE0157)配套使用。
自备实验材料:qPCR上游引物(Forward primer)。
Forward Primer设计原则
1、遵循引物设计的最普遍原则。
2、以成熟的miRNA序列为基础,将U替换成T,这是最基础和最简单的设计方法。
3、试剂盒中提供的下游引物的Tm值为63.6℃,设计上游引物的Tm值要尽量保证在63.6℃左右。
4、若按照原则“2”的方式直接设计的引物其Tm值过低,可以在引物的5’端添加几个碱基(最好为G或C碱基);也可以在3’端添加1个或几个A碱基;或者5’端和3’端同时修饰。
5、若按照原则“2”的方式直接设计的引物其Tm值过高,可以在引物的5’或3’端去掉几个碱基。
注意事项:
1、试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2、miRNA 第一链cDNA 的加入量不要超过Real time PCR 体积10%。
3、对于特殊的检测体系,高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增,根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(稀释10倍或者100倍)。
4、本产品中的2×miRNA qPCR Mixture中含有SYBR Green I和ROX染料,保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
5、避免反复冻融本品,反复冻融可能使产品性能下降,本产品长期保存可置于-20℃。如果在短期内需要频繁使用,2×miRNA qPCR Mixture可于2~8℃保存。而Reverse primer仍需置于-20℃保存。
使用方法:
1、室温融化2×miRNA qPCR Mixture和Reverse primer(10μM)。
2、使用时请将2×miRNA qPCR Mixture上下颠倒轻轻均匀混合,避免起泡,并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀,其反应性能会有所下降。
3、将试剂置于冰上,并按下表配制反应体系:
试剂 | 体积 | 终浓度 |
2×miRNA qPCR Mixture(ROX) | 10μl | 1× |
Forward primer(10μM) | 0.4μl | 0.2μM |
Reverse primer(10μM) | 0.4μl | 0.2μM |
miRNA第一链cDNA | Xμl | — |
ddH2O | up to 20μl | — |
4、反应程序设置如下:
注意!本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成!
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 10 min | |
变性 | 95℃ | 15 s | 40-45个循环 |
退火/延伸 | 60℃ | 1 min | |
溶解曲线分析 | 根据PCR仪要求设定 |
注意:
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考,发生非特异性反应时,可提高退火温度。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
北京百奥莱博科技有限公司
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