非洲猪瘟病毒实时荧光PCR试剂盒

非洲猪瘟病毒实时荧光PCR试剂盒

价格: ¥4800

品牌:AnhPCR

货号:Anh0067

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产品详情

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保存条件 :-20

保质期 :六个月

库存 :20

供应商 :雅吉生物

规格 :50

产品名称:非洲猪瘟病毒实时荧光PCR试剂盒
该产品运用PCR法的特点为:其特异性,灵敏度远高于ELASA 检测法,使用PCR 试剂盒,减少了操作步骤,降低了操作误差。
产品规格:50
产品用途:检测非洲猪瘟病毒
产品价格:由于网页规则限制,网页价格可能会有出入,具体准确价格,请联系我公司客服咨询。
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
有  效  期:六个月
       我公司PCR系列产品有:RNA纯化,DNA纯化,核酸电泳回收,探针标记与检测,核酸扩增,克隆表达等产品,蛋白质细胞生物与基因研究产品,质粒载体、微生物菌种、培养基、PCR检测试剂盒产品,原代细胞,传代细胞,gibco等进口大牌血清。
非洲猪瘟病毒实时荧光PCR试剂盒产品组成:
名称 50 头份 贮藏条件
裂解液 30 mL

室温(A 盒)
洗液 60 mL
洗脱液 10 mL
吸附柱和收集管 50
阴性对照 1 mL


-20 B 盒)
阳性对照 600 µL
无菌无核酸酶水 600 µL
RT-PCR 反应液 600 µL
酶混合液 24 µL
荧光探针 115 µL

样品制备
1 样品采集:病死或扑杀禽,取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织;待检活禽,用棉拭子取呼吸 道分泌物或排泄物,置于 50%甘油生理盐水中。2~8 ℃保存,送实验室检测。(要求送检病料新鲜, 严禁反复冻融。)
2  样品处理:每份样品分别处理。
2.1 组织样品处理:每份组织分别从三个不同的位置称取样品约 1g,用手术剪剪碎混匀后取 0.05 g 于研磨器中研磨,加入 1.5 mL 生理盐水继续研磨,待匀浆后转至 1.5 mL 灭菌离心管中,8000 rpm 离心 2 min,取上清液 100 µL 于 1.5 mL 灭菌离心管中。
2.2  全血样品处理:待血凝后取血清 100 µL,置 1.5 mL 灭菌离心管中。
2.3  阳性对照处理:取阳性对照 100 µL,置 1.5 mL 灭菌离心管中。
2.4  阴性对照处理:取阴性对照 100 µL,置 1.5 mL 灭菌离心管中。
非洲猪瘟病毒实时荧光PCR试剂盒产品部分说明书如下,如下单独详细说明书和报价,请联系我们:
操作步骤
1 病毒 RNA 的提取
1.1 取已处理的样品、阴性对照和阳性对照,分别加入裂解液 600 µL,充分颠倒混匀,室温静置 3~
5 min。
1.2  将液体吸入吸附柱中(吸附柱要套上收集管,吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质,以免离心时 堵塞吸附柱),13000 rpm 离心 30 s。
1.3  弃去收集管中液体,加入 600 µL 洗液,13000 rpm 离心 30 s。
1.4 重复步骤 1.3。
1.5 弃去收集管中液体,13000 rpm 空柱离心 2 min,以除去残留的洗涤液。
1.6  将吸附柱移入新的 1.5 mL 离心管中,向柱中央加入洗脱液 50 µL,室温静置 1 min,13000 rpm
离心 30 s,离心管中液体即为模板 RNA。
2 RT-PCR 扩增
每份总体积 20 µL,含 16.8 µL RT-PCR 反应液(用前混匀),1.2 µL 酶混合液,2 µL 模板 RNA。 例如:n 份样品,配制 n+1 份,16.8×(n+1)RT-PCR 反应液,再加入 1.2×(n+1)酶混合液,
混匀后取 18 µL 分装成 n 份,分别加入 2 µL 模板 RNA(阳性对照管加入 1 µL 阳性对照 RNA 和 1 µL X 液),加入矿物油 20 µL 覆盖(有热盖的 PCR 扩增仪不用加矿物油),作好标记。
在 PCR 扩增仪上进行以下程序:42 ℃ 45 min,95 ℃ 3 min;循环 95 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃
30 s,共 35 次;再 72 ℃延伸 10 min。
3  电泳
称 3 g 琼脂糖放于 500 mL 锥形瓶中,加入 50 倍稀释的 TAE 电泳缓冲液 200 mL(取 4 mL 50 倍 TAE 电泳缓冲液,用双蒸水稀释至 200 mL),于微波炉中熔解,再加入 10 µL 染色液混匀。在电泳 槽内放好梳子,倒入琼脂糖凝胶,待凝固后将 PCR 扩增产物 10 µL 混合 2 µL 上样缓冲液,点样于 琼脂糖凝胶孔中,以 110~120V 电压于 50 倍稀释的 TAE 电泳缓冲液中电泳,紫外灯下观察结果。
需自备的物品
1.仪器:分析天平、离心机、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪(或紫外分析仪)、 微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、500 mL 量筒、500 mL 锥形瓶、经焦碳酸二乙酯(DEPC)水处理的灭菌 1.5mL 离心管和吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)、 灭菌双蒸水。
非洲猪瘟病毒实时荧光PCR试剂盒注意事项
1.所有接触病料的物品均应合理处置,以免污染实验室。
2.PCR  整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩 增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。
3.所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化,8000 rpm 离心 15 s, 使液体全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取,使用后立 即放回-20 ℃。
4.在 RNA 提取过程中,避免 RNA 酶污染,尽量缩短操作时间。
5. 染色液低毒,操作时应戴上手套,避光保存,较长时间不使用请存放于 4℃,以免挥发变干。 染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。
6.注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的成分不要混用。
7.严格遵守操作说明可以获得结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。
8.反复冻融试剂将减低检测灵敏度,建议在 3 次内用完,请严格按试剂盒说明书操作。
结果判定    
阳性对照出现 扩增带、阴性对照无带出现(引物带除外)时,实验结果成立。 被检样品出现扩增带为禽流感病毒阳性,否则为阴性。
1 结果分析条件设定 阈值设定原则:阈值线设定于刚好超过阴性对照扩增曲线的最高点。不同仪器可根据仪器噪音
情况进行调整。
2  结果描述及判定
阳性对照 Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线,阴性对照无 Ct 值并且无特定扩增曲线,实验结果成 立;被检样品 Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线为  阳性;被检样品 30<Ct<37 并出现特定的扩 增曲线,需重新取样提取 RNA,扩增后进行结果判定,如仍是可疑,可判定为阳性;被检样品 Ct 值≥37 时,超过本方法检测灵敏度范围,判定为阴性;对于某些未呈现 S 型曲线,但本底较高的样 品,应为阴性。
如需更多产品,欢迎来电咨询我们,或咨询我们在线客服,我们将竭诚为您服务:非洲猪瘟病毒实时荧光PCR试剂盒

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